143B人骨肉瘤細(xì)胞培養(yǎng)條件與操作規(guī)范：
1. 培養(yǎng)基與環(huán)境
基礎(chǔ)培養(yǎng)基：DMEM或MEM，補(bǔ)充10%胎牛血清(FBS)、1%雙抗(青霉素/鏈霉素)。
培養(yǎng)條件：37℃、5% CO?、飽和濕度，培養(yǎng)箱濕度建議70%-80%。
容器適配：T25瓶(8-10mL培養(yǎng)基)、10cm皿(12-15mL)，根據(jù)細(xì)胞密度調(diào)整換液頻率(每2-3天一次)。
2. 關(guān)鍵操作步驟
復(fù)蘇：
37℃水浴快速解凍，離心(1000rpm，3-5min)去除凍存液。
新鮮培養(yǎng)基重懸后接種，次日觀察細(xì)胞貼壁情況。
傳代：
密度達(dá)80%-90%時(shí)，用0.25%胰酶-EDTA消化1-2分鐘，顯微鏡下觀察細(xì)胞間隙變大即終止消化。
傳代比例1:2至1:4，輕柔吹打避免氣泡，維持細(xì)胞活性。
凍存：
凍存液配方：90% FBS + 10% DMSO，密度0.5-1×10?細(xì)胞/mL。
程序降溫盒-80℃過(guò)夜后轉(zhuǎn)液氮，需復(fù)蘇驗(yàn)證活性。
3. 質(zhì)量控制
鑒定與檢測(cè)：定期進(jìn)行STR鑒定和支原體檢測(cè)，確保遺傳背景穩(wěn)定且無(wú)污染。
狀態(tài)監(jiān)測(cè)：傳代后鏡檢并拍照記錄，觀察細(xì)胞形態(tài)及碎片情況，及時(shí)清理死細(xì)胞。
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