A549細(xì)胞人肺腺癌細(xì)胞試劑盒

A549細(xì)胞人肺腺癌細(xì)胞試劑盒

---尚恩生物 186278592O3---

培養(yǎng)環(huán)境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

細(xì)胞培養(yǎng)操作

換液周期：2-3天

培養(yǎng)基體積：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml

傳代比例：1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定）

傳代方法：

1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；

2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤(rùn)洗細(xì)胞10-20s，吸走潤(rùn)洗的PBS；

3.T25瓶加1ml左右胰M，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶以使胰M鋪勻瓶底細(xì)胞層；

4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；

5.消化到細(xì)胞間隙變大，但未*脫落時(shí)加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰M消化；

6.混勻細(xì)胞，900rpm離心3-5min，棄上清；

7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；

8.補(bǔ)足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；

注意事項(xiàng) 不同品牌胰M消化時(shí)間差別較大，注意嚴(yán)格控制消化時(shí)間

消化傳代細(xì)胞時(shí)吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過(guò)多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。

細(xì)胞凍存操作

凍存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手建議)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手建議);

凍存規(guī)格：200-300萬(wàn)/ml，1ml每管

凍存方法：

1.消化并離心獲得細(xì)胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞；

2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；

3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存

注意事項(xiàng) 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案

細(xì)胞培養(yǎng)說(shuō)明

1. 細(xì)胞培養(yǎng)需要充足經(jīng)驗(yàn)，新手或者沒有類似細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)的人建議在專業(yè)人士指導(dǎo)下進(jìn)行操作，尤其注意無(wú)菌操作、貼壁細(xì)胞消化時(shí)間及細(xì)胞培養(yǎng)密度。

2. 部分細(xì)胞在傳代后時(shí)，會(huì)有以下現(xiàn)象：細(xì)胞內(nèi)會(huì)有黑色小點(diǎn)、細(xì)胞間隙有些顆粒物、培養(yǎng)基漂浮一些死細(xì)胞。以上都是細(xì)胞培養(yǎng)常見現(xiàn)象，不影響細(xì)胞增殖和實(shí)驗(yàn)。

3. 細(xì)胞內(nèi)的黑色顆粒是細(xì)胞外分泌泡、細(xì)胞器折光或者細(xì)胞膜表面物質(zhì)，這個(gè)屬于細(xì)胞自身特性，無(wú)法清除也無(wú)法改變，具體情況可以參考ATCC、DSMZ等大型細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞照片。細(xì)胞外的黑色顆粒大部分是細(xì)胞碎片，可以吸走培養(yǎng)基后用PBS潤(rùn)洗；潤(rùn)洗不能清除的可以消化細(xì)胞重新接種，消化完成后加*培養(yǎng)基終止消化，混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細(xì)胞，再離心后，用*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時(shí)碎片比較少，傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。

4. 不同品牌胰M溶液成分不一樣，消化活性差別比較大，更換胰M品牌時(shí)需重新摸索消化時(shí)間，以消化到細(xì)胞間隙變大但未漂浮為準(zhǔn)，此時(shí)結(jié)束消化最佳，避免消化過(guò)度導(dǎo)致細(xì)胞死亡。細(xì)胞消化后比較脆弱，吹打力度不要過(guò)大，不要產(chǎn)生過(guò)多氣泡，否則會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài)。

5. 不同細(xì)胞生長(zhǎng)速度差異較大，所有細(xì)胞收貨后第①次傳代建議按1:2傳代。正常培養(yǎng)時(shí)生長(zhǎng)較慢、密度較低的細(xì)胞需要傳代時(shí)按1:2傳代，生長(zhǎng)較快、密度較高的細(xì)胞可以按1:4傳代。

6. 細(xì)胞生長(zhǎng)偏慢時(shí)，可以將血清濃度增加到15-20%培養(yǎng)一段時(shí)間，待細(xì)胞狀態(tài)和生長(zhǎng)速度恢復(fù)正常后換回10%血清

關(guān)于售后：

1.所有細(xì)胞免費(fèi)售后期為一周，一周內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)異常及時(shí)拍照反饋。超出一周沒有任何反饋視為細(xì)胞培養(yǎng)正常，后期若出現(xiàn)培養(yǎng)問(wèn)題不再免費(fèi)重發(fā)。

2. 申請(qǐng)售后時(shí)請(qǐng)?zhí)峁┘?xì)胞收貨時(shí)及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息，若無(wú)清晰照片及相應(yīng)信息，不予免費(fèi)售后；若文件較多不方便在線聯(lián)系或傳送，可以向銷售索要細(xì)胞情況表，填寫后反饋給銷售。

3. 售后僅針對(duì)由于細(xì)胞自身狀態(tài)問(wèn)題導(dǎo)致不可傳代的情況，若客戶收貨一周內(nèi)已經(jīng)傳代或轉(zhuǎn)移細(xì)胞多次，出現(xiàn)死亡或者污染時(shí)不予免費(fèi)售后；若客戶在我方未允許的情況下，擅自遺棄細(xì)胞，視為客戶自身問(wèn)題導(dǎo)致細(xì)胞異常，不予免費(fèi)售后。

4. 細(xì)胞在不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個(gè)人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)、生長(zhǎng)速度、貼壁情況均可能有所差異，對(duì)于此類細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境生長(zhǎng)的行為，不予過(guò)度解釋或免費(fèi)售后。

5. 凍存細(xì)胞發(fā)貨2管，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。若客戶未反饋并復(fù)蘇2管失敗，我方將不提供免費(fèi)售后服務(wù)。凍存細(xì)胞售后均發(fā)復(fù)蘇培養(yǎng)的，若要重發(fā)凍存細(xì)胞，需補(bǔ)加干冰運(yùn)輸費(fèi)用。

6. 客戶自行凍存細(xì)胞一定要注意凍存后復(fù)蘇一管檢查凍存活性，避免凍存死亡導(dǎo)致絕種。我方不對(duì)客戶凍存細(xì)胞死亡負(fù)責(zé)，客戶凍存細(xì)胞死亡時(shí)不予免費(fèi)售后。

7. 細(xì)胞收貨后，請(qǐng)收集發(fā)貨培養(yǎng)基培養(yǎng)至少一瓶細(xì)胞，用于確定細(xì)胞培養(yǎng)條件及實(shí)驗(yàn)操作是否合適。

更多細(xì)胞有售：

H9c2[2-1] 大鼠心肌細(xì)胞

L6 大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞

RSC96 大鼠雪旺細(xì)胞

NRK-52E 大鼠腎細(xì)胞

B95.8 戎猴EBV轉(zhuǎn)化的白細(xì)胞

NIH/3T3 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

BALB/3T3 clone A31 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

3T6-Swiss albino 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

3T3-L1 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

MC3T3-E1 Subclone 14 小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14

Ana-1  小鼠巨噬細(xì)胞

WPMY-1 人正常前列腺基質(zhì)永生化細(xì)胞

MRC-5 人胚肺細(xì)胞

HFL1 人胚肺成纖維細(xì)胞

AAV-293 人胚腎細(xì)胞

293T 人胚腎細(xì)胞

293 [HEK-293] 人胚腎細(xì)胞

EA.hy926 人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞

FRhK-4恒河猴胚腎細(xì)胞

LLC-MK2恒河猴腎細(xì)胞

PIEC 豬髖動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

5637 人膀胱癌細(xì)胞

RT4 人膀胱移行細(xì)胞乳頭瘤細(xì)胞

T24 人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞

Daudi人Burkitt's 淋巴瘤細(xì)胞

HL-60 人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞

Jurkat, Clone E6-1 人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞

K562 人慢性髓原白血病細(xì)胞

MOLT-4 人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞

THP-1 人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞

HEL 人紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞

NAMALWA人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞

NCI-H292人肺癌細(xì)胞(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)

Raji 人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞

U-937 人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞

6T-CEM 人T細(xì)胞白血病細(xì)胞

CCRF-CEM 人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞

Saos-2 人成骨肉瘤細(xì)胞

SW1353 人軟骨肉瘤細(xì)胞

U2OS 人骨肉瘤細(xì)胞

BT-474 人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞

等.....

相關(guān)培養(yǎng)基均有售：

DMEM高糖

DMEM低糖

1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基

1640*培養(yǎng)基

FK12

IMEM

L15

McCoy's 5A

優(yōu)級(jí)胎牛血清

特級(jí)胎牛血清

新生牛血清

等...