1、棄去培養(yǎng)基廢液。
2、消化：加入1ml 0.125％胰酶溶液，轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶使酶液浸沒(méi)瓶底，溫浴消化2-3分鐘。
3、終止：用無(wú)血清培養(yǎng)基終止酶反應(yīng)。
4、離心：收集中和了的培養(yǎng)液，于15ml 的離心管中 1000rmp 離心10分鐘。
5、細(xì)胞重懸：棄去上清，加入1ml 無(wú)血清培養(yǎng)基用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液。
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)：血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞，并換算出細(xì)胞數(shù)量。
7、接種分瓶： 將細(xì)胞接種到含4ml無(wú)血清培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，37℃，5% CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
8、鏡檢觀察：次日觀察貼壁率，細(xì)胞形態(tài)等。