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PriCells: 動物淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的分離Ⅰ

時間:2021-9-26 閱讀:234
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PriCells: 動物淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的分離


基本方案1:

灌注消化法


實驗材料:

1. 哺乳動物胸導(dǎo)管淋巴管

2. 1×PBS,含青霉素100u/ml和鏈霉素100μg/ml,pH7.4

3. 0.2%Ⅰ型膠原酶

4. 眼科剪,眼科鑷

5. 慕絲線(7號線)、細(xì)鐵絲

6. 離心管(15ml、50ml)


實驗方法:

1. 處死動物后,打開胸腔,分離胸導(dǎo)管,在胸導(dǎo)管上端結(jié)扎,切取10-15cm的一段。將胸導(dǎo)管放入預(yù)冷PBS中漂洗。

2. 在解剖顯微鏡下,用眼科剪和眼科鑷剝除外膜的脂肪和纖維組織,然后用PBS反復(fù)沖洗管腔。

3. 將胸導(dǎo)管移入含PBS的大培養(yǎng)皿中,清洗3次。在胸導(dǎo)管的遠(yuǎn)端插入靜脈留置針,并結(jié)扎固定。用PBS沖洗管腔后,將游離端結(jié)扎。用靜脈留置針向管腔內(nèi)注入消化液,至淋巴管充盈為止。在37℃條件下,消化10min。淋巴管的管壁較薄,灌注消化時間不宜過長,以免消化過度,引起成纖維細(xì)胞的污染。

4. 取出胸導(dǎo)管,在游離端剪一小口,用離心管收集消化液,然后用培養(yǎng)液沖洗管腔,收集消化液和沖洗液,以1000r/min,離心10min。離心后吸去上清液,用培養(yǎng)液輕輕混懸細(xì)胞。

5. 將細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板中,培養(yǎng)24h后補充培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。每隔2-3d換液1次。換液時,吸去1/2-2/3培養(yǎng)液,再加入新鮮培養(yǎng)液。

6. 原代培養(yǎng)4-6h后,大部分細(xì)胞已貼壁生長。24h后,內(nèi)皮細(xì)胞形成由數(shù)個細(xì)胞組成的細(xì)胞群。淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的活性較低,原代培養(yǎng)時細(xì)胞生長緩慢。2-3周后,細(xì)胞生長形成單層。淋巴管內(nèi)皮單層呈卵石狀特征性排列,可傳代培養(yǎng)。

7. PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基

8. PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑

9. PriCells-原代細(xì)胞分離試劑盒

10. PriCells-原代細(xì)胞鑒定試劑盒


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