武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

PriCells: 正常人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)

時(shí)間:2021-10-8 閱讀:212
分享:

PriCells: 正常人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)


實(shí)驗(yàn)材料:

1. 嬰兒臍帶;

2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素,pH7.2;

3. 培養(yǎng)用液:M199培養(yǎng)液(含20%小牛血清);0.125%胰蛋白酶-0.01%EDTA(1:1,V:V)混合消化液;D-Hanks液、100IU/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素;

4. 培養(yǎng)器具:玻璃插管與輸液膠管,培養(yǎng)瓶或皿、白內(nèi)障、眼科剪、鑷子等;


培養(yǎng)方法:

1. 在無菌條件下,取健康產(chǎn)婦分娩后新鮮的嬰兒臍帶(長20cm以上,不宜超過6h),選擇無夾痕、無扭曲、無凝血阻塞的部分;

2. 在臍靜脈兩端開口處,分別用絲線扎緊并固定在50ml注射器和帶輸液膠管的玻璃插管上,注入D-Hanks液沖洗臍靜脈,至無血跡;

3. 用止血鉗夾住玻璃插管上的輸液膠管,從另一端的注射器向臍靜脈徐徐注入0.1%膠原酶溶液,至血管充盈。注意兩端封閉,以防液體返流。立即放入37℃的無菌D-Hanks液內(nèi),15min后取出;

4. 通過注射器吸取收集酶液,同時(shí)注入含20%小牛血清的M199培養(yǎng)液沖洗靜脈,合并于同一離心管內(nèi),以1000r/min離心7—10min;

5. 棄去離心沉淀后的上清液。加入20%小牛血清的M199培養(yǎng)液(pH7.2),重新懸浮細(xì)胞。并調(diào)整至細(xì)胞密度為1.5×105—2.0×105個(gè)/ml,接種于培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中。置37℃,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng);

6. 第二天棄培養(yǎng)液,用D-Hanks液輕輕洗1次,以去除不貼壁的細(xì)胞或死細(xì)胞。換入新鮮含20%小牛血清、100IU/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的M199培養(yǎng)液(pH7.2)。繼續(xù)置37℃,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng);

7. 每2—3d換培養(yǎng)液1次。換液時(shí)將原培養(yǎng)液棄掉1/2—2/3,然后加入新鮮的上述培養(yǎng)液至原來的量。待細(xì)胞長至融合狀態(tài)后,即可行傳代培養(yǎng);

8. PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基

9. PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑

10.PriCells-原代細(xì)胞分離試劑盒;

11.PriCells-原代細(xì)胞鑒定試劑盒;

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
撥打電話 產(chǎn)品分類
在線留言