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PriCells: 正常人胚肺成纖維細胞的培養(yǎng)
PriCells: 正常人胚肺成纖維細胞的培養(yǎng)
實驗材料：
1. 肺組織：取自妊娠14—18周的胎兒；
2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素，pH7.2；
3. 消化液：0.25%胰蛋白酶（pH7.6—7.8），0.02%EDTA溶液；
4. 培養(yǎng)液：DMEM或RPMI1640，加10%—20%胎牛血清、青霉素100IU/ml、鏈霉素100μg/ml；
5. 保存液：10%二甲亞砜或10%甘油；
6. 眼科剪、眼科鑷等無菌消毒手術(shù)器械；
7. 離心管（15ml、50ml）
實驗方法：
1. 取水囊引產(chǎn)的妊娠3—6個月的胎兒。用75%乙醇消毒胸壁。剖胸取出兩肺。剪去肺內(nèi)較大的支氣管后，將肺邊緣組織置于平皿中，用PBS液清洗3次，除去血液。選擇蒼白色的肺組織，剪成1mm3左右的碎塊。再用PBS液洗2—3次，直至液體澄清為止；
2. 將肺組織塊移入三角瓶中，加入5—6倍量的0.25%胰蛋白酶，密封瓶口。置4℃冰箱內(nèi)消化20h；
3. 吸棄上層液體。往三角瓶中加入少量培養(yǎng)液，用吸管反復(fù)吹打分散細胞。稍靜置，待殘存的組織塊下沉后，吸出細胞懸液；
4. 計數(shù)細胞，并用培養(yǎng)液調(diào)節(jié)細胞密度；
5. 將細胞以3×106個/ml的密度接種于培養(yǎng)瓶中，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24h后換液，除去未貼壁的細胞及細胞碎片。以后每隔2—3d換液一次；
6. 待細胞匯合成片后，用0.25%胰蛋白酶與0.02%EDTA（1：1，V/V）混合消化液消化細胞，進行繼代培養(yǎng)；
7. 如果要凍存細胞，以便長期使用，可以將成片細胞經(jīng)消化分散后，懸浮于保存液中，調(diào)節(jié)細胞密度至1.5×106—2.0×106個/ml。每管1—2ml分裝入凍存管，置于液氮罐中保存；
PriCells提供：
1. 各種原代細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
2. 各種原代細胞培養(yǎng)特制添加劑；
3. 原代細胞分離試劑盒；
4. 原代細胞鑒定試劑盒；
5. 各種原代細胞DNA；
6. 各種原代細胞RNA；
7. 各種原代細胞蛋白質(zhì)；