武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

PriCells: 正常視網(wǎng)膜米勒細胞原代培養(yǎng)

時間:2021-10-13 閱讀:220
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PriCells: 正常視網(wǎng)膜米勒細胞原代培養(yǎng)
 
實驗材料:
1. 材料來源:人眼、兔眼或者豬眼等;
2. 清洗液:不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素,pH7.2;
3. 消化液:0.25%胰蛋白酶-100IU/ml透明質酸酶混合消化液;
4. 消毒無菌的手術器械若干;
 
實驗方法:
1. 取材
(1)取自人的供體眼球;
   1) 經(jīng)常規(guī)消毒程序消毒后,于鋸齒緣后約1mm處環(huán)形切開眼球,去除前段及玻璃體;
   2) 用無齒小鑷子輕輕剝取視網(wǎng)膜組織,并用眼科小剪子剪去視乳頭周圍的視網(wǎng)膜及血管;
   3) 用PBS液稍洗,去除黏附的色素上皮細胞。置于盛有平衡鹽溶液的培養(yǎng)皿中;
(2)取自兔的供體眼球:當取出視網(wǎng)膜組織后,在解剖顯微鏡下用眼科小剪刀剪去髓放線部分及血管;
2. 原代培養(yǎng);
  1) 在處理完畢的視網(wǎng)膜組織中加入胰蛋白酶和透明質酸酶混合消化液,于37℃調間隙消化30min;
  2) 用有血清培養(yǎng)液終止消化。經(jīng)吹打后,將細胞懸液離心(800r/min)5min;
  3) 用培養(yǎng)液重新懸浮細胞,并吸走絮狀的纖維樣物質;
  4) 按4×104~6×104個細胞/ml的密度進行接種;
  5) 以常規(guī)方法培養(yǎng)。24h后取出培養(yǎng)瓶,置換培養(yǎng)液,以去除沒有貼壁的其它細胞;
  6) 每周換液2次,在細胞分裂增長至基本融合成單層時傳代;
 
PriCells提供:
1. 各種原代細胞特制基礎培養(yǎng)基;
2. 各種原代細胞培養(yǎng)特制添加劑;
3. 原代細胞分離試劑盒;
4. 原代細胞鑒定試劑盒;
5. 原代細胞總蛋白質抽提物;
6. 原代細胞總RNA;
7. 原代細胞總DNA;


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