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PriCells: 密度梯度分離法分離單個(gè)核細(xì)胞(MNCs)
PriCells: 密度梯度分離法分離單個(gè)核細(xì)胞(MNCs)
試劑和材料:
1. 合適的培養(yǎng)基或冷凍液;
2. PBSA;
3. Ficoll-Hypague;
4. 巴氏吸管;
5. 50ml離心管;
實(shí)驗(yàn)方法:
1. 將臍血樣品用PBSA按1:1比例稀釋?zhuān)?br/>2. 將15ml Ficoll-Hypague吸入50ml離心管;
3. 將30mlPBSA稀釋的臍血樣品緩慢地加到Ficoll-Hypague上;
4. 室溫450g離心20-30min;
5. 離心后,在Ficoll-Hypague液面上明細(xì)可見(jiàn)一層細(xì)胞,是密度低于Ficoll-Hypague液的單個(gè)核細(xì)胞層;
6. 用巴氏吸管,將單個(gè)核細(xì)胞層吸出,轉(zhuǎn)移到另一離心管中;
7. 用PBSA洗細(xì)胞,室溫200g離心10min;
8. 倒掉上清,用PBSA重懸細(xì)胞,洗細(xì)胞,重復(fù)上述步驟7;
9. 最后,用合適的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞(冰凍液或培養(yǎng)基);