人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自肺組織;肺是機(jī)體的呼吸器官,位于胸腔,左右各一,覆蓋于心之上。肺有分葉,左二右三,共五葉。肺經(jīng)肺系(指氣管、支氣管等)與喉、鼻相連,故稱(chēng)喉為肺之門(mén)戶(hù),鼻為肺之外竅。微血管內(nèi)皮細(xì)胞密切參與包括再生、發(fā)育、傷口愈合等一系列生理及炎癥反應(yīng)。細(xì)胞呈梭形或多角形,形成單層后呈鵝卵石樣或鋪路石樣排列。肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成半選擇性屏障,該屏障對(duì)于肺氣體交換,調(diào)節(jié)液體和可溶物在血液與肺間質(zhì)之間的流動(dòng)具有重要意義。
人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)方法:
1. 將肺組織至于無(wú)菌的培養(yǎng)皿中用含雙抗的1×PBS(pH=7.4)清洗若干次至無(wú)明顯血細(xì)胞;
2. 剪取肺組織邊緣微血管豐富的組織,用含雙抗的1×PBS(pH=7.4)清洗兩次;
3. 將剪取的肺邊緣組織剪成2-3mm3 大小,加入含雙抗的1×PBS(pH=7.4)清洗;
4. 用進(jìn)行過(guò)滅菌處理的玻璃滴管將剪碎的組織塊和清洗用的1×PBS(pH=7.4)一起轉(zhuǎn)入15ml離心管中;
5. 250rpm/min離心2 min,小心傾去液體,再加入適量的含雙抗的1×PBS(pH=7.4),用玻璃滴管吹吸液體以清洗組織塊;
6. 繼續(xù)250rpm/min離心2 min,小心傾去液體,重復(fù)上述步驟若干次,直至離心后的液體中觀察不到明顯的紅色;
7. 將清洗好的組織塊重新轉(zhuǎn)至無(wú)菌的培養(yǎng)皿中,用無(wú)菌的200 ml的吸頭將組織塊貼于25cm2 培養(yǎng)瓶中;
8. 加入2ml培養(yǎng)基,將培養(yǎng)瓶倒置放于37℃、5%CO2 的培養(yǎng)箱中2-3h之后正置培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng);
9. 培養(yǎng)若干天后,可觀察到組織塊周?chē)懤m(xù)有細(xì)胞爬出,繼續(xù)培養(yǎng)幾天,直至組織塊周?chē)募?xì)胞達(dá)到較高密度(培養(yǎng)其間兩天換液一次,換液操作時(shí)動(dòng)作一定要輕柔,以防組織塊被搖下);
10. 當(dāng)組織塊附近的細(xì)胞生長(zhǎng)到較高密度后,將貼壁的組織塊吹下,換新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24;
11. 24h后,用0.25%的Trypsin-EDTA消化細(xì)胞,F(xiàn)BS中止消化,將消化后的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入15ml離心管,1000rpm/min離心5min,之后傾去廢液,用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,轉(zhuǎn)入原來(lái)的培養(yǎng)瓶中,繼續(xù)在37℃、5%CO2 的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
以上就是人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的相關(guān)介紹,供大家參考。