人氣管上皮細(xì)胞的用途和分離培養(yǎng)方法

　　上皮細(xì)胞覆蓋于身體表面并襯貼于體內(nèi)空腔器官腔面的細(xì)胞。其排列有明顯極性，一面朝向身體表面或腔面，稱游離面；一面向著深部的結(jié)締組織，稱基底面。上皮細(xì)胞具有強(qiáng)大的角生和更新能力。上皮組織具有保護(hù)、吸收、分泌和排泄等作用。當(dāng)上皮細(xì)胞受損時(shí)，則影響機(jī)體的防御功能。

　　人氣管上皮細(xì)胞分離自氣管組Chemicalbook織；氣管上皮是氣道與外界環(huán)境接觸的第一道防線，不僅是各種病原體、炎癥介質(zhì)作用的靶細(xì)胞，還作為效應(yīng)細(xì)胞合成、釋放多種炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子從而參與氣道炎癥及免疫反應(yīng)。體外培養(yǎng)的原代人氣管上皮細(xì)胞因與體內(nèi)組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)上存在很大的相似性，因此，在基礎(chǔ)及臨床研究中極為重要。

　　人氣管上皮細(xì)胞分離培養(yǎng)：

　　獲取的氣管組織需保存于低溫PBS溶液中，消化分離前使用無(wú)菌PBS沖洗，去除多余的連接組織和淋巴結(jié)等，盡量只留氣管內(nèi)部表面組織。用手術(shù)刀將組織切成1cm×2cm的碎片，置于PBS（含1mg／ml蛋白酶XⅣ）中，4℃消化12～24h，10％FBS終止消化后，振搖分離上皮細(xì)胞，600×g離心5min。加入Chemicalbook配制好的BEGM（含100IU／ml青霉素，100IU／ml鏈霉素）培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，轉(zhuǎn)移入培養(yǎng)皿中，37℃孵育1h。采用差速貼壁法除去先貼壁的成纖維細(xì)胞后，再收集上皮細(xì)胞，調(diào)整密度后接種于Ⅰ／Ⅲ膠原包被的培養(yǎng)皿中，于37℃，5%CO2條件下培養(yǎng)。細(xì)胞貼壁后，每隔1d更換1次培養(yǎng)基，同時(shí)觀察記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)。