人氣管上皮細胞的傳代方法你知道嗎?
氣管上皮是氣道與外界環(huán)境接觸的第一道防線,不僅是各種病原體、炎癥介質作用的靶細胞,還作為效應細胞合成、釋放多種炎性介質和細胞因子從而參與氣道炎癥及免疫反應。體外培養(yǎng)的原代氣管上皮細胞因與體內(nèi)組織在形態(tài)結構和功能活動上存在很大的相似性,因此,在基礎及臨床研究中極為重要。
人氣管上皮細胞分離自氣管組織;氣管(Trachea),呼吸器官的一部分;為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣,與環(huán)狀軟骨相連;向下至第四、五胸椎體(相當胸骨角平面)交界處,分左、右主支氣管,分叉處稱為氣管杈。氣管主要由14-16個半環(huán)狀軟骨構成,有彈性,軟骨為“C”字形的軟骨環(huán),缺口向后,各軟骨環(huán)以韌帶連接起來,環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結締組織連接,保持了持續(xù)張開狀態(tài)。管腔襯以粘膜,表面覆蓋纖毛上皮,粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒,纖毛不斷向咽部擺動將粘液與灰塵排出,以凈化吸入的氣體。
人氣管上皮細胞傳代方法:
收到細胞后,取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況:
如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶后放到超菌臺內(nèi),嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,加新的10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。
如果細胞已長滿,即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:
1. 棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2. 加0.5ml消化液(0.125%Trypsin-0.25mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,倒轉放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預熱,然后又將培養(yǎng)瓶倒轉過來大約30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓分散,輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶,細胞隨即脫落下來。
3. 加入6-8mlDMEM+10%FBS培養(yǎng)液或1-2ml胰酶抑制劑,吸入離心管,離心(1000轉,6分鐘),棄上清, 加10mlLHC-8將細胞重懸,分到新的培養(yǎng)瓶中。一傳二或三。
注:1、觀察細胞最好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,否則不能準確判斷細胞的傳代密度。
2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基,細胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。