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小鼠雪旺氏細胞傳代可參考以下方法

時間:2022-9-23 閱讀:147
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  小鼠雪旺氏細胞分離神經(jīng)組織;周圍神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)膠質(zhì)細胞稱施萬(schwann,又名雪旺細胞)細胞,它沿神經(jīng)元的突起分布。施萬細胞包裹在神經(jīng)纖維上,這種神經(jīng)纖維叫有髓神經(jīng)纖維。有髓神經(jīng)纖維和無髓神經(jīng)纖維的施萬細胞的形態(tài)和功能有所差異,施萬細胞的外表面有基膜,能分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子,促進受損的神經(jīng)元的存活及其軸突的再生,參與周圍神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)纖維的構(gòu)成。施萬細胞的胞核呈長卵圓形,其長軸與軸突平行,核周有少量胞質(zhì)。
  由于施萬細胞包在軸突的外面,故又稱神經(jīng)膜細胞(neurilemmalcell),它的外面包有一層基膜。施萬細胞最外面的一層胞膜與基膜一起往往又稱神經(jīng)膜(neurilemma),光鏡下可見此膜。在有髓神經(jīng)纖維發(fā)生中,伴隨軸突一起生長的施萬細胞表面凹陷成一縱溝,軸突位于縱溝內(nèi),溝緣的胞膜相貼形成軸突系膜(mesaxon)。軸突系膜不斷伸長并反復(fù)包卷軸突,把胞質(zhì)擠至細胞的內(nèi)、外邊緣及兩端(即靠近郎氏結(jié)處),從而形成許多同心圓的螺旋膜板層,即為髓鞘。故髓鞘乃成自施萬細胞的胞膜,屬施萬細胞的一部分。施萬細胞的胞質(zhì)除見于細胞的外、內(nèi)邊緣和兩端外,還見于髓鞘板層內(nèi)的施-蘭切跡。該切跡構(gòu)成螺旋形的胞質(zhì)通道,并與細胞外、內(nèi)邊緣的胞質(zhì)相通。
  對于小鼠雪旺氏細胞,傳代可參考以下方法:
  1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
  2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
  3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
  4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
  對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
  方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
  方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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