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小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞凍存方法和復(fù)蘇原則

時間:2022-11-23 閱讀:209
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  小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞凍存方法:
  待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進行小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞|細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時,應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
  小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)蘇的原則:
  快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃,使小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞|細(xì)胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細(xì)胞形成再結(jié)晶,對細(xì)胞造成損害。
  小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自主動脈組織;主動脈是體循環(huán)的動脈主干。其運行路徑為:升主動脈起于左心室,至右側(cè)第2胸肋關(guān)節(jié)高度移行為主動脈弓,弓行向左后至第4胸椎體下緣移行為降主動脈;在第12胸椎體高度穿膈的主動脈裂孔移行為腹主動脈,以上為胸主動脈,至第4腰椎體下緣分為左、右髂總動脈;髂總動脈在骶髂關(guān)節(jié)高度分為髂內(nèi)、外動脈。主動脈內(nèi)皮細(xì)胞是覆蓋在主動脈內(nèi)面的單層細(xì)胞,可分泌一系列血管活性物質(zhì)而保持血管穩(wěn)態(tài),當(dāng)其受到炎癥或其它因素刺激后穩(wěn)態(tài)被破壞而導(dǎo)致一些心血管疾病的發(fā)生。因此,主動脈內(nèi)皮細(xì)胞已成為研究心血管疾病發(fā)病機制及治療藥物不可缺少的工具。內(nèi)皮細(xì)胞或血管內(nèi)皮是一薄層的專門上皮細(xì)胞,由一層扁平細(xì)胞所組成。它形成血管的內(nèi)壁,是血管管腔內(nèi)血液及其他血管壁(單層鱗狀上皮)的接口。內(nèi)皮細(xì)胞是沿著整個循環(huán)系統(tǒng),由心臟直至最小的微血管。

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