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目錄:上海安為生物科技有限公司>>細(xì)胞系/細(xì)胞株>>人源細(xì)胞系>> HEK-293FT人胚腎細(xì)胞 293FT

人胚腎細(xì)胞 293FT
  • 人胚腎細(xì)胞  293FT
參考價(jià) 1500
訂貨量 ≥1
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
1500
≥1
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌 安為
  • 型號 HEK-293FT
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 上海市
屬性

應(yīng)用領(lǐng)域:醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

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更新時(shí)間:2024-08-21 10:12:59瀏覽次數(shù):1496評價(jià)

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應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)
該細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)SV40大T抗原,并且促進(jìn)最適病毒產(chǎn)物的產(chǎn)生。
1.來源:胚腎
2.形態(tài):圓形,貼壁生長+懸浮生長
3.含量:>1x106 細(xì)胞數(shù)
4.規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5.用途:僅供科研使用。

293FT人胚腎細(xì)胞

[HEK-293FT  HEK293-FT ]

l 細(xì)胞鑒定

STR鑒定已通過

l 細(xì)胞來源

國家資源庫

l 細(xì)胞背景

該細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)SV40T抗原,并且促進(jìn)最適病毒產(chǎn)物的產(chǎn)生。

l 細(xì)胞特性

1.來源:胚腎

2.形態(tài):圓形,貼壁生長+懸浮生長

3.含量:>1x106  細(xì)胞數(shù)

4.規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5.用途:僅供科研使用。

l 培養(yǎng)條件

1)準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項(xiàng):

1. 細(xì)胞復(fù)蘇或傳代后會有少部分的細(xì)胞貼壁和部分懸浮的細(xì)胞,復(fù)蘇兩天后細(xì)胞會從貼壁細(xì)胞向外開始生長,有時(shí)細(xì)胞再生長過程中,細(xì)胞會再貼壁細(xì)胞的上方生長,形成不同的細(xì)胞層,這種情況會有發(fā)生。 在細(xì)胞復(fù)蘇的一周內(nèi),培養(yǎng)瓶中 通常會有懸浮的活的細(xì)胞團(tuán),在換液過程中不要丟棄在這些活的懸浮細(xì)胞,可以通過離心(125×g)回收細(xì)胞,重新打回到培養(yǎng)瓶中,分離或者丟棄漂浮的活細(xì)胞會使細(xì)胞數(shù)量變少,引起細(xì)胞的停滯生長或細(xì)胞死亡。

2.培養(yǎng)條件的細(xì)微變化,尤其是pH和培養(yǎng)基中血清的質(zhì)量,可能會影響細(xì)胞的生長狀況,在細(xì)胞的生長過程中會有細(xì)胞內(nèi)的液泡出現(xiàn),特別在細(xì)胞快要融合是會出現(xiàn)這種情況。培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)使用未被滅活的高質(zhì)量、低內(nèi)毒素的胎牛血清,可以使細(xì)胞更好的貼壁和形成單層細(xì)胞。

3. 細(xì)胞在生長過程中可以通過將血清濃度提到到20%來改善細(xì)胞生長緩慢的情況。(參考atcc 有關(guān)該細(xì)胞的描述)

l 細(xì)胞培養(yǎng)

1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

該細(xì)胞為輕微貼壁和少量懸浮培養(yǎng)細(xì)胞,傳代可以參考以下方法:

1. 收集:將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤洗后細(xì)胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T251-2mL,T752-3mL)置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3. 將收集到的懸浮細(xì)胞、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min,棄去上清,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3) 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例;

1.細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

2.1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3.將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

l 運(yùn)輸形式

低溫:11mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

常溫2 T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全

1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意:凍存管浸沒在液氮中會泄漏,并會慢慢充滿液氮。解凍時(shí),液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子,從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。





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