l 細(xì)胞鑒定

STR鑒定已通過(guò)

l 細(xì)胞來(lái)源

國(guó)家資源庫(kù)

l 細(xì)胞背景

HK-2（人類腎臟 2）是一種源自正常腎臟的近端腎小管細(xì)胞 (PTC) 系。通過(guò)用人乳頭瘤病毒 16 (HPV-16) E6/E7 基因轉(zhuǎn)導(dǎo)使細(xì)胞永生化。根據(jù)Southern 和FISH 分析，該細(xì)胞系似乎源自單個(gè)細(xì)胞。人腎近曲小管細(xì)胞HK-2含有HPV-16 E6/E7基因的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLXSN 16 E6/E7。盡管pLXSN 16 E6/E7對(duì)新霉素有抗性，但不能用G418分離轉(zhuǎn)導(dǎo)的克隆。該細(xì)胞系基于Southern和FISH分析可分離成單個(gè)細(xì)胞。通過(guò)PCR測(cè)定，E6/E7基因存在于HK-2基因組中。細(xì)胞保留分化良好的PTCs表型。堿性磷酸酶、γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、亮氨酸氨肽酶、酸性磷酸酶、細(xì)胞角蛋白、α3、β1整聯(lián)蛋白和纖連蛋白表達(dá)陽(yáng)性。VIII因子相關(guān)抗原、6.19抗原和CALLA內(nèi)肽酶表達(dá)為陰性。HK-2細(xì)胞保留著近端腎小管上皮細(xì)胞的功能特征，例如Na+依賴性/根皮苷敏感性糖轉(zhuǎn)運(yùn)和腺苷酸環(huán)化酶對(duì)甲狀旁腺有響應(yīng)，但對(duì)抗利尿激素不敏感。該細(xì)胞具有生成和儲(chǔ)存糖原的能力來(lái)證明。HK-2細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，在甲基纖維素，軟瓊脂上不生長(zhǎng)且不能懸浮生長(zhǎng)。每個(gè)批次均通過(guò)本庫(kù)支原體檢測(cè)，結(jié)果為陰性。

l 細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：腎皮質(zhì)/近端小管

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1x106  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

l 培養(yǎng)條件：

1）準(zhǔn)備 角質(zhì)細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基 (推薦：awcell-0019培養(yǎng)基，包含兩個(gè)組份：基礎(chǔ)培養(yǎng)基1瓶+生長(zhǎng)因子1管）或者 Defined K-SFM (part of kit NO:,10744-019) ，添加對(duì)應(yīng)因子，1% P/S 來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。

備注:Defined K-SFM (part of kit NO:,10744-019)培養(yǎng)液包含兩個(gè)組份：基礎(chǔ)培養(yǎng)基1瓶（貨號(hào)10785-012）+生長(zhǎng)因子1管( 貨號(hào)10784-015）

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項(xiàng)：

備注：

1. 該細(xì)胞貼壁較慢，為使細(xì)胞貼壁更容易，建議可提前在培養(yǎng)皿/培養(yǎng)瓶中鋪0.25%的明膠溶液，并于貼壁24~48小時(shí)后再進(jìn)行后續(xù)操作。

2. 該細(xì)胞生長(zhǎng)不能過(guò)密，請(qǐng)?jiān)谏L(zhǎng)密度80%時(shí)進(jìn)行傳代。

3.使用0.05%胰酶消化細(xì)胞，由于Defined K-SFM為無(wú)血清培養(yǎng)液無(wú)法終止胰酶消化，所以消化完成后要通過(guò)離心（建議125xg離心5到10分鐘）去除胰酶或者用帶10%血清的培養(yǎng)基來(lái)終止消化，再進(jìn)行后續(xù)操作。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

4）運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

l 運(yùn)輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

常溫（2） T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。