l 細胞鑒定

STR鑒定已通過

l 細胞來源

國家資源庫

l 細胞背景

來源于一位36碎白人女性，MCF 10A 來源于群體中的貼壁細胞。MCF 10A 細胞系是一種非致瘤性上皮細胞系。細胞上皮唾液黏蛋白、細胞角蛋白和乳脂肪球抗原呈陽性。它們在膠原蛋白中表現(xiàn)出三維生長，并在融合培養(yǎng)物中形成圓頂。到目前為止，細胞沒有顯示出終末分化或衰老的跡象。該線對胰島素、糖皮質(zhì)激素、霍亂腸毒素和表皮生長因子 (EGF) 有反應。通過電子顯微鏡，細胞顯示管腔導管細胞的特征，但不顯示肌上皮細胞的特征。它們還表達通過與 MFA-Breast 和 MC-5 單克隆抗體的陽性反應檢測到的乳腺特異性抗原。培養(yǎng)基中的鈣含量對細胞的形態(tài)有很強的影響。

l 培養(yǎng)條件：

1）準備MEGM kit培養(yǎng)基 （Lonza/Clonetics,CC-3150）備注：培養(yǎng)基包含（A+B）

A :  MEBM基礎培養(yǎng)液 （貨號CC-3151）         

B:  細胞生長添加劑 5管 （貨號CC-4136）         5管

1)  CC-4009G      BPE            2.0ml

2)  CC-4017G      hEGF           0.5ml

3)  CC-4021G      INSULIN        0.5ml

4)  CC-4031G    HYDROCORTISONE  0.5ml

5)  CC-4081G      GA-1000         0.5ml

C: 霍亂毒素（cholera toxin）（awcell-8070） (100ng/ml) 500 ul

D:  P/S青霉素-鏈霉素 （awcell-15140-122）         5 ml

2) 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，100%； 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

4）運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

l 運輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

常溫（2） T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。