深圳市安培生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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轉(zhuǎn)染HGF-1牙齦成纖維細(xì)胞, 質(zhì)粒大小10646bp

時(shí)間:2021/7/5閱讀:1262
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1.可轉(zhuǎn)染極度難轉(zhuǎn)染的免疫細(xì)胞,懸浮細(xì)胞,如T細(xì)胞,NK細(xì)胞、人淋巴細(xì)胞、THP-1等;

2.可高效率轉(zhuǎn)染sirRNA、小分子到任何哺乳動(dòng)物細(xì)胞;

3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞后可10小時(shí)內(nèi)快速代謝的第三代新轉(zhuǎn)染試劑;

轉(zhuǎn)染條件:

細(xì)胞密度:60左右

質(zhì)粒DNA濃度:648ng/ul

質(zhì)粒DNA大?。?0646bp

培養(yǎng)板:6孔板

轉(zhuǎn)染試劑用量:8ul

質(zhì)粒DNA用量:電訊

轉(zhuǎn)染試劑:AD600150,Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑

轉(zhuǎn)染時(shí)間:48小時(shí)

血清:z7010-500 胎牛血清

細(xì)胞凍存:CE70100T無血清細(xì)胞凍存液

細(xì)胞活力檢測(cè):K009-500,cck8

 

 

重要指導(dǎo)方針:

-質(zhì)粒DNA必須溶解在ddH 2 O中。如果溶解在Buffer中,轉(zhuǎn)染效率會(huì)下降70%,甚至導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失敗。

-質(zhì)粒DNA必須去內(nèi)毒素,否則轉(zhuǎn)染效率會(huì)下降70%,甚至導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失敗。

- 在制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí),不能使用其他試劑稀釋核酸或轉(zhuǎn)染試劑。只需將核酸和轉(zhuǎn)染試劑按照1:1的關(guān)系直接混合即可。否則,轉(zhuǎn)染效率將下降80%,甚至導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失敗。

-檢查并與轉(zhuǎn)染試劑混合后,用移液管吹吸10-15次以充分混合,確保管壁無液體殘留。

- 將核酸與轉(zhuǎn)染試劑混合并在室溫下孵育至少 10-15 分鐘。

- 將復(fù)合物加入細(xì)胞培養(yǎng)板并輕輕混勻,將板置于 CO 2 培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

- 在整個(gè)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)過程中,細(xì)胞可以在*培養(yǎng)基中培養(yǎng),而不是使用無血清培養(yǎng)基。

- 如果轉(zhuǎn)染后顯微鏡下觀察到白色或黑色圓形顆粒,則為轉(zhuǎn)染試劑的新材料顆粒。

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