免疫組化（IHC）的10大實戰(zhàn)經(jīng)驗（附臨床上常用免疫組化指標）

1.把要做的切片先分好，做幾個抗體可分幾盒，不正常組織與正常組織要分開。其余做預(yù)實驗用。 

2.選擇實驗要做的抗體時，要結(jié)合他們的正常組織和癌組織的分別表達率。

3.試劑盒的選擇可結(jié)合生物素強弱的情況。如：肝組織生物素含量高，S-P 試劑盒生物素含量也高，故不能配合使用。 

4.每次開始做時，都必須先清點實驗的必需品是否齊全。想好可能發(fā)生的意外，并先想好補救措施。當抗體不夠用的情況下，原先買的抗體最好不要用完，留做可能需要的驗證試驗。新的抗體要盡量同公司，同批號。

5.烤片（單一或綜合）程度要適情況而定，可中途拿出甩一甩，盡可能先放在烤箱里烤 3 小時以上。切勿把片烤得太久了。程度剛好，脫蠟效果才會好。注意做好不同條件的切片標記。注意溫度穩(wěn)定，再烤片。 

6.二甲苯脫蠟。溫度過低時，可先把二甲苯整罐放進烤箱加熱，或者可把片放在二甲苯里一起加熱脫蠟，這樣效果會更好；若溫度適宜，那還是在室溫下脫蠟，要不可能會適得其反。時間也是適情況而定。

7.高壓修復(fù)時，要注意稀釋比例，修復(fù)液的種類（EDTA 不可以重新進行利用，可能發(fā)生交叉作用），PH 值等。高壓鍋內(nèi)壓力未降至正常時不可打開，壓力正常后可多放會兒，能更好的利用余壓，把握程度。若是多次修復(fù)，每次都需先把鍋內(nèi)熱水倒掉，換冷水，保證條件的可重復(fù)性。 

8.抗體反復(fù)凍融可使效價降低。抗體要防止污染。不可用塑料保存，塑料可吸附抗體?？贵w稀釋：應(yīng)遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配"的原則，對于 PBS（其他稀釋液，注意 PH 值，PBS 為偏中堿性）稀釋的抗體最好要當天使用。稀釋比例恰好為佳，注意前帶和后帶效應(yīng)。

9.吹干封片時不能有泡泡。若是沒封好，可進行二甲苯、酒精脫樹膠，吹干再次封片，但鏡下效果會明顯變差。因而，若沒必要，最好不要再次脫膠。DAB 顯色需用中性樹膠封片，AEC （易溶于有機溶劑）需用水性膠封片。 

10.剛封完的載玻片會移動，故切片還沒干時，盡量不要碰到蓋玻片，可避免樹膠溢出，片的整體效果不好。

附錄：臨床上常用免疫組化指標 

通常惡性腫瘤，免疫組化耐藥預(yù)后標記（共 4 個 marker）為：P-gp，GSTπ，TOPOII，Ki-67。而乳腺癌免疫組化耐藥預(yù)后標記（共 7 個 marker）為：P-gp，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67，ER， PR，C-erbB-2。