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DNA提取方法簡介

時間：2021/10/22閱讀：3898
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一、DNA提取方法簡介


1、基因組DNA的提取

1.1、CTAB法

1.2、SDS法

1.3、其它

2、非基因組DNA的提取

2.1、質(zhì)粒DNA的提取

2.1.1、堿裂解法

2.1.2、煮沸法

2.2、線粒體、葉綠體DNA的提取

差速離心結(jié)合SDS裂解法

1、基因組DNA的提取


1.2、SDS法


SDS法原理


SDS是一種陰離子去垢劑，在高溫（55～65℃）條件下能裂解細(xì)胞，使染色體離析，蛋白變性，釋放出核酸；
提高鹽(KAc或NH4Ac)濃度并降低溫度（冰浴），使蛋白質(zhì)及多糖雜質(zhì)沉淀，離心后除去沉淀；
上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反復(fù)抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。


SDS法DNA提取緩沖液


 圖片


改良的SDS法


 圖片


水浴 60min, 其間緩慢搖動幾次。加入150ul 的5mol/ LKac, 混勻, 冰浴15min 左右。

SDS法流程圖 （以動物組織為例）


圖片


1.3、其它

根據(jù)細(xì)胞裂解方式的不同有：

物理方式

玻璃珠法

研磨法

超聲波法

凍融法

化學(xué)方式

異硫氰酸胍法

堿裂解法

生物方式

酶法

根據(jù)核酸分離純化方式的不同有：

吸附材料結(jié)合法

 

 

硅質(zhì)材料

 

高鹽低pH值結(jié)合核酸，低鹽高pH值洗脫。快捷高效。

陰離子交換樹脂

低鹽高pH值結(jié)合核酸，高鹽低pH值洗脫。適用于純度要求高的實驗。

磁珠

磁性微粒掛上不同基團(tuán)可吸附不同的目的物，從而達(dá)到分離目的。

濃鹽法

利用RNP和DNP在鹽溶液中溶解度不同，將二者分離

有機(jī)溶劑抽提法

有機(jī)溶劑作為蛋白變性劑，同時抑制核酸酶的降解作用

密度梯度離心法

利用不同內(nèi)容物密度不同的原理分離各種內(nèi)容物



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