您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)！ 登錄| 免費注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)！ 登錄| 免費注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
19126518388
當(dāng)前位置：深圳市安培生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>磁性活化細胞分選法（MACS）
緩沖液
磁性細胞分離器 分離柱適配器 陽性選擇柱 符合收集容積的收集器 磁性微珠
一、標(biāo)記
1. 標(biāo)準方法分離外周血單核細胞或經(jīng)酶消化法及其他方法制備的細胞懸液。
2. 用 Ficoll-Paque 去除死細胞。
3. 用 30 μm 尼龍網(wǎng)篩或濾膜（Myltenyi，# 414: 07）過濾細胞去除細胞團塊 （濾膜應(yīng)用前用緩沖液濕潤）。
4. 緩沖液（D-PBS，pH 7.2 ，含 0.5 % BSA 和 2 mmol/L EDTA）洗滌細胞，離心。
5. 重新懸浮離心細胞，每 107 個細胞懸浮于 80 μl 緩沖液（80 μl 為最少*，即使總細胞數(shù)低于 107 個）。
6. 按每 107 個細胞加微珠標(biāo)記液 20 μl。
7. 混勻，6~12℃ 孵育 15 min (對于更少的細胞，用同樣體積的微珠標(biāo)記液）。
8. 加入 10~20 倍于標(biāo)記液體積的緩沖液稀釋細胞。
9. 300 g 離心 10 min。
10. 去上清，按每 108 個細胞加緩沖液 500 μl 重新懸浮結(jié)合了微珠的細胞。
二、陽性磁性分離
11. 將分離柱放入 MACS 分離器（MiniMACS、MidiMACS、VarioMMMACS，或 SuperMACS（Miltenyi））的磁性區(qū)。
12. 洗柱：MS＋/ RS＋ 500 μl； LS＋/ VS＋ 3 ml。
13. 將細胞懸液加人分離柱中：MS＋/ RS＋ 500~1000 μl； LS＋/ VS＋ 1~10 ml。
14. 讓陰性細胞流過分離柱。
15. 用緩沖液淋洗柱子： MS＋/ RS＋ 3×500 μl； LS＋/ VS＋ 3×3 ml。
16. 將分離柱從分離器中取出放置在收集管上。
17. 用吸管加適量緩沖液于柱中（MS＋/ RS＋ 1 ml； LS＋/ VS＋ 5 ml），推動針管式活塞洗脫陽性標(biāo)記細胞。
18. 細胞計數(shù)，用生長培養(yǎng)基調(diào)整濃度。
(a)原代培養(yǎng)調(diào)整為1×105~1×106 /ml，接種于培養(yǎng)瓶中；
(b)克隆培養(yǎng)調(diào)整為 10~1000 /ml，接種于培養(yǎng)皿。
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業(yè)自行提供，信息內(nèi)容的真實性、準確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負責(zé)，化工儀器網(wǎng)對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示：為規(guī)避購買風(fēng)險，建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。
