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深圳市安培生物科技有限公司

中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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當(dāng)前位置：深圳市安培生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>大鼠大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)——機(jī)械性劃割培養(yǎng)

產(chǎn)品分類(lèi)品牌分類(lèi)

血清系列: SERANA胎牛血清低內(nèi)毒素膠原蛋白 ZETA LIFE胎牛血清

細(xì)胞轉(zhuǎn)染: 活體轉(zhuǎn)染試劑 LIPO3000轉(zhuǎn)染試劑高效轉(zhuǎn)染試劑

支原體清除: 支原體去除試劑

細(xì)胞凍存: 無(wú)血清細(xì)胞凍存液

實(shí)驗(yàn)耗材: 多功能開(kāi)關(guān)器封板膜 PCR & qPCR 孔板 qPCR耗材 PCR耗材

分子試劑: RNA提取等溫?cái)U(kuò)增克隆突變 PCR系列核酸提取純化核酸染料

細(xì)胞增殖與凋亡: 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)

Biozellen系列: 鼠尾膠原蛋白 3D基質(zhì)膠

培養(yǎng)基: 內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基細(xì)胞添加劑無(wú)血清培養(yǎng)基

ELISA試劑盒: 豬ELISA試劑盒小鼠ELISA試劑盒

TOYOBO（東洋紡）: PCR相關(guān)試劑

ZYMO RESEARCH: 試劑盒

Greiner（格瑞納）: 細(xì)胞培養(yǎng)小室

IKA（艾卡）: 刀頭

化學(xué)發(fā)光底物（ECL）: ECL化學(xué)發(fā)光液

PROSPEC系列: 單胺氧化酶

Epigentek系列: 細(xì)胞分析試劑盒

微生物檢測(cè): 生化鑒定試劑盒

細(xì)胞生物學(xué): 細(xì)胞輔助試劑細(xì)胞檢測(cè)試劑

Corning康寧: 凍存管嵌套/小室

解離試劑: 胰蛋白酶

細(xì)胞類(lèi)-實(shí)驗(yàn)耗材: 細(xì)胞培養(yǎng)瓶細(xì)胞培養(yǎng)皿細(xì)胞培養(yǎng)板

原代細(xì)胞: 小鼠原代細(xì)胞

植物檢測(cè)系列試劑盒: 植物激素系列植物氧化與抗氧化系列植物氮代謝系列植物脂肪酸代謝系列植物固氮作用系列植物呼吸作用系列植物光合作用檢測(cè)試劑盒

SERANA: BSA

細(xì)胞系: 人源細(xì)胞系

生化試劑盒

環(huán)境檢測(cè)系列試劑盒（AKEN）: 土壤氧化還原酶系列

類(lèi)器官培養(yǎng): 培養(yǎng)試劑盒

緩沖器和解決方案: 抗生素培養(yǎng)添加物隱窩增強(qiáng)劑保護(hù)液洗滌液凍存液解離液

生物三凝膠基質(zhì): 細(xì)胞外基質(zhì)

細(xì)胞因子分子: 抑制劑激動(dòng)劑

生物樣本庫(kù): 類(lèi)器官

蛋白研究系列: 蛋白緩沖 ALP發(fā)光液 ECL系列轉(zhuǎn)印膜轉(zhuǎn)膜封閉 PAGE凝膠試劑盒蛋白電泳蛋白制備免疫檢測(cè)

修飾檢測(cè)試劑盒: 蛋白修飾檢測(cè)試劑盒

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大鼠大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)——機(jī)械性劃割培養(yǎng)

時(shí)間：2021/12/5閱讀：1334

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材料與儀器

SD大鼠
硼酸硼砂緩沖液胰酶-EDTA 消化液 D-Hanks’
眼科剪滴管離心機(jī) 培養(yǎng)皿 CO2培養(yǎng)箱

步驟

一、實(shí)驗(yàn)步驟

1. 孕16 d SD 大鼠經(jīng)戊巴（匕匕）妥鈉麻醉后，碘酒、75%乙醇消毒腹部皮膚，依次剪開(kāi)皮膚、肌肉、皮下筋膜，無(wú)菌操作下取出胚胎放入預(yù)冷的D-Hanks’平衡鹽液中。

2. 在解剖顯微鏡下分離并取出胚胎大腦皮層，除去腦膜，剪碎組織成約1mm3 大小，加入胰酶-EDTA 消化液并放入 37℃孵箱內(nèi)消化20 min，中間搖晃一次。

3. 隨后用滴管吸出組織轉(zhuǎn)移到裝有預(yù)冷的培養(yǎng)液(DMEM＋10%FBS)的離心管內(nèi)終止消化液作用5 min。

4. 用滴管吸出組織轉(zhuǎn)移到裝有預(yù)冷的 DMEM＋10%FBS 的離心管內(nèi)，用火焰拋光的巴斯德滴管吹打數(shù)次，靜置后取上清吸到另一支離心管內(nèi)。重復(fù)上述步驟 2～3 次。

5. 將所收集的上清經(jīng)200 目篩網(wǎng)過(guò)濾。

6. 過(guò)濾后的細(xì)胞懸液于800 rpm 離心5 min，棄上清，管內(nèi)加入新鮮培養(yǎng)液(DMEM＋20%FBS)并吹打成單細(xì)胞懸液。

7. 細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度按1.5x105/cm2 種入6 孔板內(nèi)，放入CO2 孵箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)48 h 后換液并加入Ara-C使其終濃度為 1x10-5 mM/L。Ara-C作用24 h 后全量換液。以后每隔 3 天半量換液一次。



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