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轉(zhuǎn)化實驗中，應(yīng)選擇什么PCR酶？

時間：2022/6/8閱讀：1498
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轉(zhuǎn)化實驗中，應(yīng)選擇什么PCR酶

  1. Taq酶
  2. 高保真酶


這取決于你的克隆方案，是用平末端還是粘性末端。

如果后續(xù)克隆用平末端連接，可以使用高保真酶，產(chǎn)生的末端就是就平末端，進行平末端連接。

如果后續(xù)克隆用粘性末端，使用普通的Taq酶就可以了。Taq會在產(chǎn)物末端多帶一個A尾巴，對應(yīng)的載體是帶T尾巴的T載體。

如果在引物設(shè)計上，在PCR產(chǎn)物末端引入一些酶切位點序列，那么尾巴就會更長。加入尾巴時應(yīng)考慮目的基因插入載體的方向，設(shè)計酶切位點序列尾巴。如果尾巴設(shè)計反了，插入的目的基因也是反方向的，就無法起效。



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