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當(dāng)前位置:深圳市安培生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>夏天到了,您做好預(yù)防細(xì)胞污染了嗎?
注意事項:
夏天到了,天氣炎熱,空氣中的溫度濕度都在上升,這時最易滋生細(xì)菌等微生物,導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)過程會沒有那么的順利,總是被污染,而且微生物繁殖的速度非???。今天我們就來說道說道細(xì)胞污染應(yīng)該怎么預(yù)防、處理。
目前細(xì)胞污染大致可分為:細(xì)菌、真菌、支原體、黑膠蟲、病毒等污染。那么想要解決問題,我們就需要知道細(xì)胞是遭受了何種污染,才可對癥下藥。接下來我們將帶領(lǐng)大家逐步分析這些污染。
細(xì) 菌
細(xì)菌污染時,培養(yǎng)基在短時間內(nèi)變成黃色或白色渾濁,有時稍加震蕩,便會有很多混濁物漂起。有些狀況下培養(yǎng)基顏色改變不明顯但細(xì)胞形態(tài)會變異(出現(xiàn)多角,多核狀況)、細(xì)胞不附著。
細(xì)菌屬于原核生物,比細(xì)胞小很多,在顯微鏡下或成黑色細(xì)沙狀,或背景有大量黑點??赡茉斐杉?xì)胞增殖緩慢或形態(tài)上的改變(多角、多核等),細(xì)胞質(zhì)中產(chǎn)生空泡、細(xì)胞不附著。
如遇細(xì)菌污染,我們可以如何處理呢?
合理使用相應(yīng)抗生素可殺滅細(xì)菌:
抗生素 | 作用對象 | 使用比例 | 儲存條件 |
卡那霉素溶液 | 細(xì)菌(如G+、G-)、支原體 | 稀釋:1:100 | -20oC |
硫酸慶大霉素溶液 | 細(xì)菌(如G+、G-)、支原體 | 稀釋: 1:1000 | AMB室溫(15-30℃) |
青鏈雙抗 | 細(xì)菌(如G+、G-) | 稀釋: 1:100 | -20oC |
青鏈雙抗,10濃縮液 | 細(xì)菌(如G+、G-) | 稀釋: 1:1000 | -20oC |
青鏈霉素,制霉菌素三抗 | 細(xì)菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌) | 稀釋: 1:100 | -20oC |
青鏈霉素,兩性霉素素B三抗 | 細(xì)菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌) | 稀釋: 1:100 | -20oC |
青鏈霉素,新霉素三抗 | 細(xì)菌(如G+、G-) | 稀釋: 1:100 | -20oC |
真 菌
真菌指的是類似棉絮狀的漂浮物,真菌是真核生物,比細(xì)胞大。在顯微鏡下可觀察到菌絲體,真菌有菌絲體,呈絲狀、管狀、樹狀、串珠狀。真菌一般呈菌落聚集生長。污染早期不會使培養(yǎng)基變黃。
細(xì)胞被真菌污染后,仍可生長,長時間細(xì)胞的活力狀態(tài)會變差,梅雨季時的污染率會提高。
真菌的種類也比較多:酵母菌、念珠菌、霉菌(青霉菌、根霉菌、曲霉)、蕈菌等。這些菌類都有各自的特點,很容易區(qū)分。
酵母菌:成串的卵狀物,體積為細(xì)胞的1/5~1/10倍,可由出芽生殖時的一大一小連體結(jié)構(gòu)識別,污染嚴(yán)重時會造成培養(yǎng)基pH值改變,不易去除。
念珠菌:卵圓狀,在細(xì)胞周邊生長。
霉菌:霉菌在我們的生活中無處不在,它比較青睞于溫暖潮濕的環(huán)境,一有合適的環(huán)境就會大量的繁殖,有綠色,毛茸茸的青霉菌,還有像樹根一樣根霉菌。
如果發(fā)現(xiàn)真菌污染,我們?nèi)绾芜M行處理呢?
合理使用相對應(yīng)的抗生素,可有效殺滅真菌污染:
抗生素 | 作用對象 | 使用比例 | 儲存條件 |
兩性霉素素B | 真菌(如:酵母菌、霉菌) | 稀釋:1:1000 ~ 1: 10,000 | -20oC |
制霉菌素 | 真菌(如:酵母菌、霉菌) | 稀釋:1:100 ~ 1:1000 | -20oC |
青鏈霉素,制霉菌素三抗 | 細(xì)菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌) | 稀釋: 1:100 | -20oC |
青鏈霉素,兩性霉素素B三抗 | 細(xì)菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌) | 稀釋: 1:100 | -20oC |
支 原 體
支原體常來源于實驗人員(支原體常見于人體皮膚、呼吸道、生殖道和消化道)、動物源血清及胰酶、消毒不*的器具,體積只有0.15~0.3μm,所以能通過一般培養(yǎng)基0.2μm過濾膜進入培養(yǎng)基體系,培養(yǎng)基不會變黃,所以污染時不容易用常規(guī)方法發(fā)現(xiàn),光學(xué)顯微鏡難以辨識。
支原體革蘭染色為陰性,大部分支原體繁殖速度比細(xì)菌慢,對青霉素類的抗生素不敏感。污染不但會緩慢的改變細(xì)胞形態(tài)(拉絲、鋪展)、增殖、基因表達、蛋白合成及代謝反應(yīng),它攜帶的DNA/RNA與蛋白更可能造成QPCR或Western Blot結(jié)果偏差。
方案一:BIOMYC-1(03-036)和BIOMYC-2(03-037)的使用方法:
加1ml的 BIOMYC-1 溶液至100ml培養(yǎng)基中,保持受污染的細(xì)胞在混合液中培養(yǎng)4天,期間可用含 BIOMYC-1 的新培養(yǎng)基對細(xì)胞進行傳代;
4天后,加1ml BIOMYC-2 溶液至100ml的新培養(yǎng)基中,并維持培養(yǎng)3天,期間可進行傳代。
以上是一個處理周期,必要時可繼續(xù) 2-3 次處理周期。
每過一個周期,細(xì)胞需要做支原體污染檢測,以確認(rèn)效果,從而適當(dāng)減少實驗過程。
方案二:BIOMYC-3(03-038)的使用方法:
加1ml BIOMYC-3至100ml培養(yǎng)基中;
持續(xù)培養(yǎng)14天,期間可進行傳代;
以上是一個處理周期,必要時可繼續(xù) 2-3 次處理周期。
每過一個周期,細(xì)胞需要做支原體污染檢測,以確認(rèn)效果,從而適當(dāng)減少實驗過程。
提 示
支原體殺除試劑對實驗幾乎沒有影響,可進行細(xì)胞實驗;如果客戶使用其中一種方案,不能清除支原體,說明該支原體可能在另一種方案的抑菌譜內(nèi);最佳方案是先用方案一處理一周期,再用方案二處理一周期,然后做支原體檢測。
黑 膠 蟲
目前科學(xué)界對黑膠蟲并無定論,認(rèn)為是不明沉淀現(xiàn)象或多種未知生物污染現(xiàn)象的通稱。
黑膠蟲不是一個新的物種,是大家對顯微鏡下會活躍游動或原代打轉(zhuǎn)、顫動的未經(jīng)測序鑒定的微生物的別稱。因為多呈黑點的游動,被大家稱為“黑膠蟲"。實際上,它不是蟲子,經(jīng)過我們對多個客戶提供的黑膠蟲樣本測序,發(fā)現(xiàn)實際上它是各種細(xì)菌。大多數(shù)細(xì)菌都有鞭毛,這也就不難理解,它為啥會像蟲子一樣游動或原地打轉(zhuǎn),顫動。
在高倍率顯微鏡頭下,可觀察到各式形狀的小黑點(卵圓狀、球狀、桿狀等)、活躍的布朗運動及明顯游動現(xiàn)象。
復(fù)蘇或傳代時往往會出現(xiàn)黑膠蟲污染,并且與細(xì)胞呈現(xiàn)此消彼長的現(xiàn)象,部分黑膠蟲具有細(xì)胞毒性,可引起細(xì)胞生長遲緩或裂解凋亡,培養(yǎng)基不渾濁。
方案一:BIOMYC-1(03-036)和BIOMYC-2(03-037)和三抗(03-033)的使用方法:
加1ml的 BIOMYC-1 和三抗溶液至 100ml培養(yǎng)基中,保持受污染的細(xì)胞在混合液中培養(yǎng) 4 天。期間需加入含 BIOMYC-1和三抗溶液的少許的新培養(yǎng)基;
4天后,加1ml BIOMYC-2和三抗溶液至 100ml 的新培養(yǎng)基中,并維持培養(yǎng) 3 天;
以上是一個處理周期,必要時可繼續(xù) 2-3 次如上處理循環(huán)。
方案二:BIOMYC-3(03-038)和三抗(03-033)的使用方法:
加1ml BIOMYC-3和三抗溶液至100ml培養(yǎng)基中;
持續(xù)培養(yǎng)14天,期間每2-3天更換一次培養(yǎng)基;
以上是一個處理周期,必要時可繼續(xù) 2-3 次如上處理循環(huán)。
在處理過程中,細(xì)胞需要做支原體污染檢測,以確認(rèn)效果,從而適當(dāng)減少實驗過程。
以上污染與實驗室環(huán)境,溫度濕度等都有較大的關(guān)系,因此細(xì)胞房我們也需要提前做好預(yù)防。
以上就是本期的內(nèi)容,更多資訊,歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。
安培生物科技有限公司介紹:
安培生物堅持為生命科學(xué)研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶,提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴增和生產(chǎn),包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等,為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù);提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品;提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)
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