如何培養(yǎng)大鼠平滑肌細胞？

一、  器械
顯微器械：眼科剪一把，直彎眼科鑷各一把，細結(jié)鑷一把，手術(shù)刀一把，針頭諾干
殺老鼠器械：手術(shù)剪一把，大鑷子一把，彎眼科鑷一把，組織鉗一把，50ml燒杯一個（錫紙包好）
另外：10ml離心管兩個，培養(yǎng)皿兩個，10ml的瓶子三個，小濾器兩個，硅膠板一塊，培養(yǎng)瓶蓋子諾干

二、試劑
D-HANKS液250ml，雙抗2ml（青霉素16萬U/ml鏈霉素15萬U/ml），一型膠原酶，木瓜酶，BSA。后三種加上D-HANKS配成1ml的消化液，終濃度皆為1mg/ml。無血清DMEM和含20％FBS的DMEM

三、步驟
1．  取大鼠，稱重，水合氯醛0。3ml/100g腹腔麻醉
2．  綁好大鼠，先剪開腹腔，剪斷腹部大動脈放血，后剪開胸腔，取肺
3．  放入燒杯，后移入超凈臺，置于冰盒上。以后的操作皆在冰盒上操作
4．  倒入已加雙抗的D-HANKS，清洗肺部，扯掉食管，剪掉心臟
5．  用針頭將肺固定在硅膠板上，硅膠板置于培養(yǎng)皿里
6．  用鑷子將肺的內(nèi)外膜除去，只剩下平滑肌
7．  用眼科剪將肺部剪成1－2mm的小碎塊
8．  將碎塊移入配好的消化液中，放入培養(yǎng)箱中，消化15min
9．  取出，加入無血清的DMEM，約10ml，移入離心管中
10．  980轉(zhuǎn)/min，離心10min
11．  倒掉上清，加入約1ml含20％FBS的DMEM
12．  將碎塊用滴管加入25ml的培養(yǎng)瓶里，液體不要加多，有種濕濕的感覺即可。一到兩天可以再加點液體
13．  大概五到七天可以爬出

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