SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離蛋白質(zhì)的基本原理是蛋白質(zhì)在 SDS 和巰基乙醇的作用下，分子中的二硫鍵還原，氫鍵打開，形成帶負(fù)電荷的 SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物，聚丙烯酰胺（PAGE）是一種具有三維結(jié)構(gòu)的網(wǎng)狀高分子聚合物，具有分子篩的作用。蛋白質(zhì)在 PAGE 電泳中向正極遷移，遷移速率取決于分子的大小、電荷及其空間結(jié)構(gòu)。SDS 帶有較強(qiáng)的負(fù)電荷，不同的蛋白質(zhì)與之結(jié)合后具有相同的荷質(zhì)比，并具有相似的空間構(gòu)象，使得 SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物在 PAGE 中的遷移速率只與蛋白質(zhì)的分子大小相關(guān)。

免疫沉淀法分離蛋白質(zhì)的基本原理是是利用特異的抗體從細(xì)胞裂解物中分離目的蛋白的一種沉淀方法。該方法首先要制備細(xì)胞裂解液，然后將特異性抗體加到細(xì)胞裂解液中，4 ℃ 下孵育一定時間后，再加入可以與特異性抗體結(jié)合的固相化分子使之形成不溶性抗原-抗體復(fù)合物而沉淀。將沉淀下來的抗原-抗體復(fù)合物在含有 SDS 和 DTT 的緩沖液中加熱后，使被沉淀的抗原釋放出來，經(jīng)電泳分離后即可用各種方法檢測。

雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離蛋白質(zhì)是根據(jù)蛋白質(zhì)的兩個一級屬性-等電點和分子質(zhì)量的特異性，將蛋白質(zhì)混合物在電荷（等電聚焦，IEF）和分子質(zhì)量（變性聚丙烯酰胺凝胺電泳，SDS-PAGE）兩個水平上進(jìn)行分離。2D-PAGE 的第一向電泳是等電聚焦電泳（IEF），蛋白質(zhì)因所帶凈電荷的不同而被分離開；然后對蛋白質(zhì)進(jìn)行第二向電泳-SDS-PAGE，在 SDS-PAGE 中，不同分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)相互間分離開。由于蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量和所帶凈電荷是兩個彼此不相關(guān)的重要性質(zhì)，而 2D-PAGE 同時利用了蛋白質(zhì)間在這兩個性質(zhì)上的差異分離蛋白質(zhì)。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅持為生命科學(xué)研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)

蛋白質(zhì)分離實驗

簡介

原理

會員登錄

收藏該商鋪

提示