染料排斥法測定細(xì)胞生存力實(shí)驗(yàn)

材料與儀器

胰蛋白酶
巴斯德吸管 顯微鏡 手執(zhí)計(jì)數(shù)器 生存力染料 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

步驟

材料

無菌

受試細(xì)胞，如胰蛋白酶消化的貼壁細(xì)胞、融化冷凍的細(xì)胞或原代離散的細(xì)胞
合適的生長液 20ml
0.25% 胰蛋白酶 5ml
D-PBSA10ml

非滅菌

血細(xì)胞計(jì)數(shù)板
生存力染料 1ml (如用D-PBSA 或HBSS 配制的 0.4% 臺盼藍(lán)或 1% 萘黑）
巴斯德吸管
顯微鏡
手執(zhí)計(jì)數(shù)器

操作步驟

1. 用胰蛋白酶消化或離心與重懸，制備高濃度的細(xì)胞懸液（約1X106 個/ml)。

2. 取一塊干凈的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，將蓋玻片間定在適當(dāng)位置上。

3 . 將一滴細(xì)胞懸液和一滴（臺盼藍(lán)）或四滴（萘黑）染料混勻。

4 . 加至血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室中。

5 . 靜置1～2min (但不要放置很久，否則活細(xì)胞會受到損傷而吸收染料）。

6 . 將計(jì)數(shù)板置于顯微鏡下，選擇10X 物鏡，利用網(wǎng)格線聚焦。
7 . 計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)以及著色細(xì)胞數(shù)。

8 .清洗血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，放人盒內(nèi)。

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