深圳市安培生物科技有限公司
中級會員 | 第5年

19126518388

血清系列
細(xì)胞轉(zhuǎn)染
支原體清除
細(xì)胞凍存
實(shí)驗(yàn)耗材
分子試劑
細(xì)胞增殖與凋亡
Biozellen系列
培養(yǎng)基
ELISA試劑盒
TOYOBO（東洋紡）
ZYMO RESEARCH
Greiner（格瑞納）
IKA（艾卡）
化學(xué)發(fā)光底物（ECL）
PROSPEC系列
Epigentek系列
微生物檢測
細(xì)胞生物學(xué)
Corning康寧
解離試劑
細(xì)胞類-實(shí)驗(yàn)耗材
原代細(xì)胞
植物檢測系列試劑盒
SERANA
BSA
細(xì)胞系
生化試劑盒
環(huán)境檢測系列試劑盒（AKEN）
類器官培養(yǎng)
緩沖器和解決方案
生物三凝膠基質(zhì)
細(xì)胞因子分子
生物樣本庫

混合淋巴細(xì)胞增殖

時間：2023/1/11閱讀：1047
分享：

簡介

混合淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)也稱混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（MLC）或稱混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（MLR），常用于器-官-移-植前的組織配型，以測定受體和供體主要組織相容性抗原（HLA 抗原）相容的程度。

材料與儀器

器材：細(xì)胞培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板、吸管等、CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱、超凈臺。
試劑：
① 10％FCS-RPMI 1640 培養(yǎng)基 ;
② 細(xì)胞 DCs 細(xì)胞、反應(yīng)細(xì)胞、外周血單個核細(xì)胞。
③ 3 H-TdR 工作液


步驟

混合淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的基本過程可分為如下幾步：
（一）刺激細(xì)胞（DCs）的制備
A. 取健康志愿者肝素抗凝的外周血，淋巴細(xì)胞分離液分離單個核細(xì)胞
B. 以 10％ FCS-RPMI 1640 懸浮細(xì)胞置培養(yǎng)瓶中，37℃、5％ CO2 培養(yǎng) 2 小時，輕輕翻過培養(yǎng)瓶，棄掉培養(yǎng)上清，將非貼壁細(xì)胞棄掉，即得貼壁的單核細(xì)胞
C. 補(bǔ)加 10％ FCS-RPMI 1640 同時加入 20 ng/ml 的 hGM-CSF，500 IU/ml 的 IL-4，培養(yǎng)至第 7 天，收集懸浮細(xì)胞，即為 DCs
D. 刺激細(xì)胞經(jīng) 25 μg/ml 的絲-裂-霉-素 C 或 2000 rad y-射線照射處理使刺激細(xì)胞失去增殖能力。
（二）反應(yīng)細(xì)胞的制備
A 取健康人外周血制備單核細(xì)胞，PBS 洗 3 次后，37℃、5％ CO2 貼壁 2 小時，收集懸浮細(xì)胞，作為反應(yīng)細(xì)胞
B 以 RPMI 1640 培養(yǎng)液重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度至 1x106 個/ml。
（三）混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)
A 將刺激細(xì)胞調(diào)整濃度分別為 1x106、5x105、2x10、1x105、5x104 個/ml， 10％FCS-RPMI 1640 培養(yǎng)于 96 孔培養(yǎng)板中，每濃度設(shè)立 3 孔，100μL/孔
B 將反應(yīng)細(xì)胞濃度按 1x106 個/ml 每孔分別加入上述各孔中，100μl/孔
C 同時設(shè)立刺激細(xì)胞對照組（不同濃度刺激細(xì)胞 100μl＋培養(yǎng)液 100μl）和反應(yīng)細(xì)胞對照組（反應(yīng)細(xì)胞 100μl＋培養(yǎng)液 100μl）
D 37℃，5％ CO2 培養(yǎng) 5 天后，3 H-TdR 摻入率檢測反應(yīng)細(xì)胞的增殖水平。


注意事項(xiàng)

1. 實(shí)驗(yàn)中注意無菌操作
2. 如作單向混合淋巴細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，則刺激細(xì)胞接受照射劑量要準(zhǔn)確，使細(xì)胞暫時存活，但失去增殖的能力。


以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。


安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅持為生命科學(xué)研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。


會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏！
標(biāo)簽：
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)

常用：

提示

X
您的留言已提交成功！我們將在第一時間回復(fù)您~
撥打電話
在線留言