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當前位置:深圳市安培生物科技有限公司>>技術文章>>葉綠體被膜完整性的測定
原理
材料與儀器
步驟
1. 取0.1ml葉綠體提取液加到0.9ml的蒸餾水中并攪拌1min,使葉綠體被膜脹破,加1ml測定介質Ⅰ懸浮備用。
2. 取0.1ml未脹破葉綠體提取液加入反應杯中,視反應杯體積加入測定介質Ⅱ,加入適量鐵氰-化-鉀和NH4Cl,使鐵氰-化-鉀和NH4Cl的最終濃度都為1mmol/L。攪拌,平衡1min,照光測定Hill反應放氧速率,記錄5min,然后清洗反應杯。
3. 將已脹破葉綠體加入反應杯中,再加入適量測定介質Ⅱ、鐵氰-化-鉀和NH4Cl,使反應體系物質最終濃度同未脹破葉綠體測定體系,測定過程同2。
4. 分別計算脹破和未脹破的葉綠體測定體系中單位時間的放氧量(或Hill反應速率)。
5. 計算被膜完整度。
注意事項
1. 本實驗所用玻璃要存放在冰箱中,存放時間不宜過長,最好現(xiàn)配現(xiàn)用。
2. 葉綠體的分離要在0~4℃下進行,玻璃器皿和溶液都須預冷,操作要快,整個分離過程最好在5min內完成。
3. 離心過程中離心機的轉速不宜過高,否則葉綠體中的淀粉粒會打破葉綠體被膜。
4. 被膜完整度的測定過程中,反應杯內破碎葉綠體與完整葉綠體的葉綠素含量應相等。
常見問題
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安培生物科技有限公司介紹:
安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領域客戶,提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn),包括培養(yǎng)間充質干細胞和多種免疫細胞系等,為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務;提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質膠產(chǎn)品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領域提供優(yōu)質的產(chǎn)品和技術服務,努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)。
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