細(xì)胞爬片免疫組化染色實(shí)驗(yàn)步驟

原理：

免疫組織化學(xué)技術(shù)：檢測組織原位表達(dá)的肽類、激素、神經(jīng)遞質(zhì)、細(xì)胞因子、受體、表面抗原等抗原性物質(zhì)。

（一）組織和細(xì)胞標(biāo)本的準(zhǔn)備

1. 組織標(biāo)本的取材-取材新鮮，固定及時，形態(tài)完好。

   
   

2. 細(xì)胞標(biāo)本的準(zhǔn)備

（1）活體細(xì)胞標(biāo)本：印片法、穿刺吸取法、沉淀法

（2）培養(yǎng)細(xì)胞標(biāo)本：

① 細(xì)胞涂片: 將細(xì)胞制成懸液（10^6）涂在 涂有切片粘合劑的載玻片上，晾干后固定（細(xì)胞甩片）。

②細(xì)胞爬片: 將細(xì)胞直接培養(yǎng)在蓋玻片上 將細(xì)胞直接培養(yǎng)在6孔或9孔板上。

3.固定

(1)保持形態(tài)：終止和抑制外源性和內(nèi)源性酶活性，防止 組織細(xì)胞的死后變化，防止自溶和腐敗，保持組織細(xì)胞的固有形態(tài)。

(2)保存抗原：使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖和酶等各種抗原成份轉(zhuǎn)變成不溶性物質(zhì)，以保持它原有的結(jié)構(gòu)和定位與生活時相仿。

（3）硬化作用：固定劑兼有硬化作用、使組織硬化、增加組織硬度、便于制片。

（4）便于觀察：使組織中的各種物質(zhì)沉淀和凝固起來而產(chǎn)生不同的折射率，造成光學(xué)差異，以便染色后易于鑒別和觀察;經(jīng)過固定的組織能對染料產(chǎn)生不同的親和力而著色清晰，便于辨認(rèn)。

注意事項(xiàng)：

①防止脫片：玻片預(yù)處理(多聚賴氨酸)、溫和操作。

②力求保持組織新鮮， 勿使其干燥， 盡快固定處理。

③組織塊不易過大過厚，必須小于 2cm x 1.5cm x 0.3cm，尤其是組織塊厚度須保持在0.3cm 以內(nèi)。

④固定劑必須有足夠的量，在體積上一般大于組織20倍。

⑤組織固定后， 應(yīng)充分水洗，去除固定劑，以減少固定劑造成的人為假像。

（三）細(xì)胞爬片的免疫組化染色

1. 取出細(xì)胞爬片，迅速置入冷丙酮固定 20 ～30 分鐘。

2. 蒸餾水浸泡 5 分鐘，2 次。

3. 打孔液浸泡 5 分鐘。

4. 蒸餾水浸泡 5 分鐘，2 次。

5. 后接前述實(shí)驗(yàn)步驟的第 6 步（正常血清封閉）。

注：第 3、4 步僅用于檢測細(xì)胞內(nèi)抗原，檢測細(xì)胞膜抗原時不用。

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