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WB蛋白樣本煮多久合適?

時(shí)間:2024/4/28閱讀:738
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WB蛋白樣本煮制時(shí)間的那些事兒

大家在進(jìn)行 WB 實(shí)驗(yàn)時(shí),可能會(huì)有這樣的疑問:蛋白樣本到底煮多久合適呢???
通常來說,WB 蛋白樣本的煮制時(shí)間在 3-5 分鐘左右。不過,這只是一個(gè)大致的范圍哦,具體時(shí)間還得根據(jù)實(shí)際情況來調(diào)整。
通常6孔板細(xì)胞80%以上密度,需200ul,其他按平板面積比類推。

在煮制蛋白樣本時(shí),有幾點(diǎn)需要注意哦:

1.煮制時(shí)間不宜過長,不然可能會(huì)導(dǎo)致蛋白變性,影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果;

2.煮制溫度控制在95-100°C之間為宜;

3.煮制過程中要記得混勻樣本,確保樣本受熱均勻。

當(dāng)樣品核酸、蛋白濃度過高時(shí),煮樣后會(huì)發(fā)現(xiàn)槍頭吸不上來,非常粘、一砣一砣的,很容易堵住槍頭
這時(shí)候建議兩種處理方法:
1.再煮5min。常規(guī)煮樣時(shí)間3-5min,樣品過濃時(shí)就煮10min;
2.如果10min煮樣后,仍然吸不起來,才適當(dāng)增加buffer,繼續(xù)煮;也可以對(duì)樣品進(jìn)行超聲。煮樣時(shí)間若過長,蛋白會(huì)凝固,此時(shí)已失去繼續(xù)WB的意義,請(qǐng)丟棄(判斷標(biāo)準(zhǔn):出現(xiàn)明顯的蛋白沉淀和水分層)。

如果你對(duì)煮制時(shí)間拿不準(zhǔn),不妨先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),找到最恰當(dāng)的煮制時(shí)間吧!


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