in vivo Advanced 活體動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑

1. 描述

in vivo Advanced 活體動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑可以通過靜脈注射或體內(nèi)局部組織注射的方式完成轉(zhuǎn)染過程。此外，轉(zhuǎn)染過程中總注射體積較小，致密組織可通過顯微注射來完成轉(zhuǎn)染，且轉(zhuǎn)染復(fù)合物在體內(nèi)循環(huán)時間較長。DNA，siRNA 及共轉(zhuǎn)染均可用此款轉(zhuǎn)染試劑來完成轉(zhuǎn)染操作。

2. 基本條件

1> DNA

濃度: 300 ng/ul - 2 μg/ul;

溶劑: 質(zhì)粒 DNA 需溶于雙蒸水或超純水;

內(nèi)毒素: 去內(nèi)毒素

2> RNA 濃度: 20 μM, 40 μM, 60 μM, 80 μM

3. 活體動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染操作步驟

1> 轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備: 核酸和轉(zhuǎn)染試劑直接按照 1:1 混合。之后用移液器吹打混合溶液 10-15 次以充分混勻。將混合溶液于室溫環(huán)境中靜置 10-15 分鐘，轉(zhuǎn)染復(fù)合物即可制備結(jié)束。在復(fù)合物制備過程中，離心管的管壁要確保沒有液體殘留。

2> 用注射器或顯微注射針完成靜脈注射或局部組織注射操作。

3> 注射后 3-5 天，轉(zhuǎn)染效率可達(dá)到峰值，靶基因的表達(dá)量可于此時進(jìn)行檢測。

活體動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染注射用量

4. 注意事項

1> DNA (μg) 或 20 μM siRNA (μl)與轉(zhuǎn)染試劑的比例為 1:1。

2> 上表中 siRNA 的注射體積是針對 20 μM siRNA 的。如果 siRNA 的濃度為 40 μM，則注射體積需減半；如果 siRNA 的濃度為 80 μM，則注射體積需為表中體積的 1/4；以此類推。

3> 進(jìn)行局部組織注射實驗時，轉(zhuǎn)染復(fù)合物的用量為 5-10 μl/cm2。

4> 進(jìn)行共轉(zhuǎn)染實驗時，核酸總用量應(yīng)和上表中用量一致，各種核酸用量的比例應(yīng)根據(jù)實驗?zāi)康倪M(jìn)行調(diào)整。之后將各種核酸與轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行充分混合。

5> 在具體實驗操作過程中，核酸和轉(zhuǎn)染試劑的用量可根據(jù)上表中最大注射用量進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。