用于懸浮/貼壁哺乳動(dòng)物真核細(xì)胞的大容量核酸轉(zhuǎn)染儀

 

LONZA 4D-Nucleofector LV 大規(guī)模細(xì)胞核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)（4D-Nucleofector LV Unit，簡(jiǎn)稱LV模塊，或LV單元），是在傳統(tǒng)電穿孔技術(shù)的基礎(chǔ)上，針對(duì)每一種細(xì)胞，優(yōu)化電脈沖參數(shù)、轉(zhuǎn)染液，使細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率、細(xì)胞活率得到顯著提升，解決了原代細(xì)胞、干細(xì)胞、T細(xì)胞等使用傳統(tǒng)電穿孔轉(zhuǎn)染效率低下的問題。

4D-Nucleofector核轉(zhuǎn)技術(shù)（原德國(guó)Amaxa Nucleofection核轉(zhuǎn)染技術(shù)）對(duì)質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率高達(dá)90％，寡核苷酸（如siRNA）轉(zhuǎn)染效率高達(dá)99％，面世20年來，已成功轉(zhuǎn)染＞1200種細(xì)胞系、＞130種原代細(xì)胞，并在干細(xì)胞、免疫細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等各類較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中獲得了優(yōu)秀的轉(zhuǎn)染效果。

同時(shí)，4D-Nucleofector核轉(zhuǎn)染可讓外源基因直接穿過核膜進(jìn)入細(xì)胞核，不依賴細(xì)胞有絲，實(shí)現(xiàn)2小時(shí)快速表達(dá)。LONZA 4D-Nucleofector LV模塊可提供單次2×10^9個(gè)細(xì)胞、封閉、無菌的高效轉(zhuǎn)染，在人T細(xì)胞、CHO懸浮細(xì)胞、HEK23懸浮細(xì)胞、K562細(xì)胞等超過700種細(xì)胞中大量應(yīng)用。

LONZA共享數(shù)據(jù)庫，包含超過1500種原代細(xì)胞、細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染數(shù)據(jù)，提供包括細(xì)胞來源、傳代、培養(yǎng)條件、培養(yǎng)基、到轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)技巧的成熟流程，讓研究者在海量數(shù)據(jù)支持中快速開展實(shí)驗(yàn)，并取得成功。操作4D-Nucleofector核轉(zhuǎn)染設(shè)備時(shí)，只需一鍵調(diào)用LONZA內(nèi)置的轉(zhuǎn)染程序，即可實(shí)現(xiàn)細(xì)胞快速、高效轉(zhuǎn)染，而無需自行摸索轉(zhuǎn)染條件。



 

4D-Nucleofector核轉(zhuǎn)染技術(shù)優(yōu)勢(shì)

-采用高分子聚合物電極，避免傳統(tǒng)鋁電極的離子毒害，維持細(xì)胞生理狀態(tài)，提高存活率。
-轉(zhuǎn)染后可快速觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，例如轉(zhuǎn)染GFP后2小時(shí)可觀察到蛋白。
-無需自己優(yōu)化條件，擁有超過650種細(xì)胞類型的現(xiàn)成程序，可直接使用，共享數(shù)據(jù)庫，超過1500條轉(zhuǎn)染數(shù)據(jù)可供參考。
-可轉(zhuǎn)染包括DNA、mRNA、miRNA、siRNA、肽、蛋白質(zhì)在內(nèi)的多種底物。
-可用于難以轉(zhuǎn)染的原代細(xì)胞、干細(xì)胞、神經(jīng)元、細(xì)胞系。
-靈活的轉(zhuǎn)染規(guī)?？s放，可在低、中、高通量中輕松轉(zhuǎn)移，實(shí)現(xiàn)2×10^4至1×10^9個(gè)細(xì)胞數(shù)量的輕松擴(kuò)展。
-已在8000多家同行評(píng)議的出版物中發(fā)表。

 

 


LONZA 4D-Nucleofector LV大規(guī)模細(xì)胞核轉(zhuǎn)染儀，細(xì)胞治療基礎(chǔ)研究高效電轉(zhuǎn)染系統(tǒng)


1、封閉、無菌的系統(tǒng)和耗材設(shè)計(jì)，滿足細(xì)胞治療基礎(chǔ)研究的需求。


 

 

 

2、20mL大容量，LV核轉(zhuǎn)儀提供單次1mL（最多1×10^8個(gè)細(xì)胞）的手動(dòng)加樣、20×1mL（最多2×10^9個(gè)細(xì)胞）的自動(dòng)加樣，快速高效。


 

 

 

3、符合cGMP要求，可使用符合美國(guó)FDA21 CFR part 11、歐盟Annex 11的軟件進(jìn)行控制，適用于嚴(yán)格監(jiān)管的GMP實(shí)驗(yàn)室。

①用戶管理（登陸，不同級(jí)別）
②具有用戶姓名與時(shí)間標(biāo)記的電子簽名
③任何記錄的修改或是數(shù)據(jù)的創(chuàng)建均被記錄在案
④結(jié)果報(bào)告：失敗報(bào)告，以及詳細(xì)的問題描述
⑤可根據(jù)21CFR part11的要求導(dǎo)出數(shù)據(jù)（加密，預(yù)防）
⑥審計(jì)追蹤（使用記錄、更改記錄）
⑦無數(shù)據(jù)刪除可能

 

 

 

4、規(guī)?？珊?jiǎn)單放大，在4D-Nucleofector X模塊（4D-Nucleofector X Unit，簡(jiǎn)稱X模塊，或X單元）上進(jìn)行的2×10^4細(xì)胞數(shù)量的優(yōu)化轉(zhuǎn)染方案，可直接在LV模塊上使用。


 

 

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：分別用4D-Nucleofector細(xì)胞核轉(zhuǎn)儀X模塊（100μL）、LV模塊（1mL）向包括人T細(xì)胞、PBMC、293細(xì)胞、CHO細(xì)胞在內(nèi)多種代表性細(xì)胞中轉(zhuǎn)染pmaxGFP載體，實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)染規(guī)模的線性放大。




 



參考文獻(xiàn)

1.Closed-system transposon-mediated manufacture of GMP grade CAR T-cells via the Lonza Nucleofector LV XL.  LM Brownrigg,et al. ELSERIER(2020)
2.Biomimetic mineralized collagen scaffolds and their effect on osteogenic differentiation. L Luo,et al. ELSERIER(2020)
3.Optimization of clarification process for viral vectors. B Raghavan,et al. ELSERIER(2020)
4.Generation and testing of clinical-grade exosomes for pancreatic cancer. Mayela Mendt,et al. JCI Insight(2018)
5.Off the shelf T cell therapies for hematologic malignancies. BJ McCreedy,et al. ELSERIER(2018)
6.Unlocking the Potential of CRISPR-Based Gene Editing. Andrea Toell. Genetic Engineering & Biotechnology News(2017)

注：常用模塊組合參考：C+X+LV，X模塊用于小規(guī)模優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，LV模塊用于大規(guī)模轉(zhuǎn)染。

LONZA 4D-Nucleofector LV大規(guī)模核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，基因治療研究的不二工具。

1、作為非病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)，適用于不同的基因編輯系統(tǒng)，如鋅指核酸酶(ZFN)、轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物核酸酶（TALEN）、CRISPR/Cas系統(tǒng)。
2、可轉(zhuǎn)染多種不同的底物，如DNA、mRNA、蛋白（如Cas9 RNP），由于轉(zhuǎn)染條件相同，可進(jìn)行不同底物的簡(jiǎn)單共轉(zhuǎn)染。
3、常用于應(yīng)用iPS、CD34+造血干細(xì)胞、T細(xì)胞的穩(wěn)定修飾。
4、技術(shù)成熟可靠，有≥80本基因編輯相關(guān)出版物刊載，眾多領(lǐng)域的學(xué)者正在使用4D-Nucleofector技術(shù)，發(fā)表文章超過10,000篇，并持續(xù)不斷增加中！

LONZA 4D-Nucleofector大規(guī)模核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，作為轉(zhuǎn)染人原代T細(xì)胞的強(qiáng)大方法，與CRISPR和其他基因組編輯技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用，已成為基因治療基礎(chǔ)研究的理想工具。