PCR實(shí)驗(yàn)室耗材質(zhì)檢——PCR管
(1)滲漏密閉性:將n個(gè)PCR管加入半量墨汁,蓋好蓋子后放入水中,浸泡30min,沒(méi)有墨汁滲出為合格。
(2)離心密閉性:將n個(gè)PCR管加入半量純水,放入離心機(jī),1000 rpm,30min,管蓋未崩開(kāi)未漏液為合格。
(3)熱密閉性:將n個(gè)PCR管加入半量純水,蓋好蓋子稱重后放入PCR儀,設(shè)置一個(gè)常用的PCR程序,程序運(yùn)行完畢后,再進(jìn)行稱重,PCR管未變形,管蓋未崩開(kāi)未漏液,前后重量未變化為合格。。
(4)冷密閉性:將n個(gè)PCR管加入半量純水,放入-20℃冰箱,24h,離心管未變形,管蓋未崩開(kāi)未漏液為合格。
(5)污染物質(zhì)檢:將n個(gè)PCR管加入半量陰性純水,蓋好蓋子渦旋1 min后靜置5min,作為模板進(jìn)行擴(kuò)增,qPCR無(wú)擴(kuò)增為合格。
(6)抑制物質(zhì)檢:將n個(gè)PCR管分別加入弱陽(yáng)性質(zhì)控物,室溫靜置5min,然后進(jìn)行提取;RNA核酸,DNA核酸,室溫靜置5min,作為模板進(jìn)行擴(kuò)增,qPCR擴(kuò)增未被抑制為合格。
(7)空白熒光通透性:對(duì)于qPCR,需要考察PCR管是否有非特異性熒光信號(hào),將n個(gè)空PCR管,蓋好蓋子后放入PCR儀,設(shè)置一個(gè)常用的PCR程序,程序運(yùn)行完畢后,qPCR無(wú)擴(kuò)增為合格。
(8)陽(yáng)性熒光通透性:對(duì)于qPCR,還需要考察PCR管是否會(huì)抑制熒光的通透性,將n個(gè)含弱陽(yáng)性樣品和擴(kuò)增試劑的PCR管,與確認(rèn)無(wú)熒光干擾的PCR管,蓋好蓋子后放入PCR儀一同擴(kuò)增,設(shè)置一個(gè)常用的PCR程序,程序運(yùn)行完畢后,qPCR擴(kuò)增未被抑制為合格。