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PCR實(shí)驗(yàn)室污染怎么辦？

閱讀：1344 發(fā)布時(shí)間：2021-8-16

PCR檢測(cè)因其高靈敏度、快速、操作方便等優(yōu)勢(shì)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用，不過(guò)正是由于它靈敏度*，極微量的污染源都有可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性，因此，如何避免以及處理實(shí)驗(yàn)室污染，對(duì)PCR人來(lái)說(shuō)是一門必修課。

1.實(shí)驗(yàn)室污染分類

樣本間交叉污染

主要是在采（?。拥倪^(guò)程中，由于取樣工具之間的交叉造成污染；或者在核酸提取的過(guò)程中，由于移液器、離心管等使用不當(dāng)導(dǎo)致的污染。

PCR試劑的污染

主要是在PCR試劑配制過(guò)程中，由于移液器、容器、陰性對(duì)照及其它試劑被核酸模板或陽(yáng)性對(duì)照污染。

克隆質(zhì)粒的污染

在實(shí)驗(yàn)室操作中經(jīng)常會(huì)用到陽(yáng)性參考品，這些陽(yáng)性參考品大多數(shù)是由某些克隆質(zhì)粒制作而成，克隆質(zhì)粒在單位容積內(nèi)濃度高，不小心使用極易造成污染。

PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染

這是PCR反應(yīng)中主要常見的污染問(wèn)題。因?yàn)镻CR產(chǎn)物拷貝量大，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測(cè)數(shù)個(gè)拷貝的極限，所以極微量的PCR產(chǎn)物污染，就可造成假陽(yáng)性結(jié)果。還有一種容易忽視，可能造成PCR產(chǎn)物污染的形式是氣溶膠污染，在空氣與液體面摩擦?xí)r就可形成氣溶膠，據(jù)計(jì)算一個(gè)氣溶膠顆粒可含4.8萬(wàn)拷貝，因而由其造成的污染是一個(gè)值得特別重視的問(wèn)題。

2.消除污染的操作步驟

?物料準(zhǔn)備

（1）購(gòu)買噴壺（能夠噴出霧狀水汽的即可）；

（2）購(gòu)買市面上有效氯消毒片，根據(jù)要求配制不同濃度的消毒液，或者購(gòu)買成品次氯酸鈉消毒液配制合適濃度消毒水；

（3）購(gòu)買核酸氣溶膠污染清除劑（DNA AWAY®原液/MediClean®稀釋100倍）；

（4）無(wú)紡布/無(wú)塵紙等。

處理方法

（1）清理廢液缸并且對(duì)廢液缸用有效氯含量為2000mg/L消毒水浸泡消除核酸污染；

（2）用有效氯含量為2000mg/L消毒水對(duì)移液槍進(jìn)行擦洗，關(guān)鍵部位為移液槍前端易污染部位，清潔干凈后用潔凈水再擦拭一遍；

（3）將離心管架、擴(kuò)增管架、擴(kuò)增管架底板、吸嘴盒及其他相關(guān)物品用有效氯含量為500mg/L的消毒水浸泡2小時(shí)后，用清水沖洗干凈晾干后使用；

（4）對(duì)污染區(qū)域內(nèi)的設(shè)備如擴(kuò)增儀、全自動(dòng)提取儀等，使用核酸氣溶膠污染清除劑進(jìn)行反復(fù)處理；對(duì)生物安全柜等含有空氣過(guò)濾系統(tǒng)的設(shè)備，需更換過(guò)濾網(wǎng)；

（5）用有效氯含量為500mg/L的消毒液對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)室（地板、墻面、天花板、門、窗戶等地方）進(jìn)行清潔，并且用用有效氯含量為1000mg/L的消毒水對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行噴霧消毒(重點(diǎn)部位為操作區(qū))，有效降解空氣中的氣溶膠與附著在實(shí)驗(yàn)臺(tái)表面的核酸污染；同時(shí)加大通風(fēng)量（內(nèi)循環(huán)無(wú)用，盡可能外循環(huán)）；

（6）待污染區(qū)域及設(shè)備器件清理完成后，常用設(shè)備和操作臺(tái)面使用移動(dòng)紫外消毒車近距離輻照1小時(shí)；實(shí)驗(yàn)室內(nèi)則使用室內(nèi)紫外燈整晚輻照。

步驟（1）-（6）必須堅(jiān)持每天進(jìn)行，確保消除實(shí)驗(yàn)室污染；

污染消除判斷標(biāo)準(zhǔn)

設(shè)計(jì)陰性對(duì)照組，根據(jù)陰性對(duì)照確認(rèn)污染情況?？墒褂贸ㄩ_后隔夜放置操作區(qū)的陰性對(duì)照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)（在單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證），若連續(xù)三天陰性對(duì)照沒有起跳，則說(shuō)明污染得到控制，可恢復(fù)正常實(shí)驗(yàn)。

當(dāng)然，為較大程度的降低可能出現(xiàn)的PCR污染或杜絕污染的出現(xiàn)，在實(shí)驗(yàn)室前期設(shè)計(jì)及日常實(shí)驗(yàn)室管理和操作中，就需要進(jìn)行合理的規(guī)劃以及嚴(yán)格執(zhí)行實(shí)驗(yàn)室SOP，把污染的可能性扼殺在搖籃中。

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