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原代代培養(yǎng)體系一般由以下四種 (三種) 組成:
名稱 | 體積 | 保存條件 |
基礎培養(yǎng)基 | 500ml | 4℃、避光 |
添加劑 | 5ml | -20℃、避光 |
胎牛血清 (FBS) | 0-50ml | -20℃、避光 |
雙抗 (青霉素/鏈霉素,P/S) | 5ml | -20℃、避光 |
添加劑和雙抗通常濃度為 100X(100 倍工作濃度)。血清的添加比例有 0%(不添加),1%(5ml), 2% (10ml),5% (25ml),10% (50ml) 幾種。
第一次使用時先將-20℃保存的添加劑、雙抗、FBS 轉移到 4℃溶解后,在滅菌后的百級潔凈 等級環(huán)境中操作,所使用的容器和移液耗材均需要進行過無菌處理。
首先將解凍的 FBS、添加劑和雙抗進行分裝,平均分裝成 5- 10 份,留下本次配制所需要的量, 剩余的繼續(xù)放回-20℃保存,之后按需取用融化后配制培養(yǎng)基,避免反復凍融。
建議用無菌的 50ml 離心管盛裝配置好的培養(yǎng)基。
配制方法:在每個 50ml 離心管中加入①500ul 添加劑、②500ul 雙抗、③50×血清百分比 ml 的胎牛血清、④ (50× (1-血清百分比) - 1) ml 的基礎培養(yǎng)基。配制完成后蓋上蓋子, 顛倒混勻備用。
例如:在血清比例為 5%的條件下,50ml 離心管中各組分的體積分別為:
基礎培養(yǎng)基:(50× (1-5%) - 1) =46.5ml+添加劑:500ul +雙抗:500ul+血清:50×5%=2.5ml
配置好的培養(yǎng)基置于 4℃避光保存。由于添加劑中有很多重組蛋白,易發(fā)生降解,故配置好的培養(yǎng)基有效期僅為 3-4 周,請盡快使用。因此建議每次配制 1-2 管 (50- 100ml),當然 使用量大的情況下也可以適量增加配置量。
P.S. :不建議客戶將全部的血清、雙抗、添加劑直接加入基礎培養(yǎng)中混勻使用,原因如下: 1.500ml 的基礎培養(yǎng)基的體積較大,灌裝時體積波動很大,直接加入,無法準確地控制因子 和血清的工作濃度。
2. 配制好的培養(yǎng)基僅能在 4℃保存 3-4 周,如果期間沒用完,繼續(xù)使用會影響培養(yǎng)效果。 如果是-20℃保存,可以延長保存時間,但是反復凍融也會影響培養(yǎng)基的效果。
3. 如果使用培養(yǎng)基時由于操作失誤導致污染,分裝能減少培養(yǎng)基的損失量。
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