原代細胞培養(yǎng)體系配置方法

原代代培養(yǎng)體系一般由以下四種 (三種) 組成：

添加劑和雙抗通常濃度為 100X(100 倍工作濃度)。血清的添加比例有 0%(不添加)，1%(5ml)， 2%  (10ml)，5%  (25ml)，10%  (50ml) 幾種。

第一次使用時先將-20℃保存的添加劑、雙抗、FBS 轉移到 4℃溶解后，在滅菌后的百級潔凈 等級環(huán)境中操作，所使用的容器和移液耗材均需要進行過無菌處理。

首先將解凍的 FBS、添加劑和雙抗進行分裝，平均分裝成 5- 10 份，留下本次配制所需要的量， 剩余的繼續(xù)放回-20℃保存，之后按需取用融化后配制培養(yǎng)基，避免反復凍融。

建議用無菌的 50ml 離心管盛裝配置好的培養(yǎng)基。

配制方法：在每個 50ml 離心管中加入①500ul 添加劑、②500ul 雙抗、③50×血清百分比 ml 的胎牛血清、④ (50× (1-血清百分比) - 1) ml 的基礎培養(yǎng)基。配制完成后蓋上蓋子， 顛倒混勻備用。

例如：在血清比例為 5%的條件下，50ml 離心管中各組分的體積分別為：

基礎培養(yǎng)基：(50× (1-5%) - 1) =46.5ml+添加劑：500ul +雙抗：500ul+血清：50×5%=2.5ml

配置好的培養(yǎng)基置于 4℃避光保存。由于添加劑中有很多重組蛋白，易發(fā)生降解，故配置好的培養(yǎng)基有效期僅為 3-4 周，請盡快使用。因此建議每次配制 1-2 管 (50- 100ml)，當然 使用量大的情況下也可以適量增加配置量。

P.S. ：不建議客戶將全部的血清、雙抗、添加劑直接加入基礎培養(yǎng)中混勻使用，原因如下： 1.500ml 的基礎培養(yǎng)基的體積較大，灌裝時體積波動很大，直接加入，無法準確地控制因子 和血清的工作濃度。

2.     配制好的培養(yǎng)基僅能在 4℃保存 3-4 周，如果期間沒用完，繼續(xù)使用會影響培養(yǎng)效果。 如果是-20℃保存，可以延長保存時間，但是反復凍融也會影響培養(yǎng)基的效果。

3.      如果使用培養(yǎng)基時由于操作失誤導致污染，分裝能減少培養(yǎng)基的損失量。