當前位置:上海倍維敏科技有限公司>>技術文章>>上皮細胞類培養(yǎng)實驗
實驗原理:
利于皮膚表皮細胞實驗">培養(yǎng)成功的因素有,在有膠原的底物上易生長;另有人發(fā)現(xiàn)把人或小鼠表皮細胞培養(yǎng)在以3T3 細胞為飼養(yǎng)層(用射線照射后)上時,細胞易生長并可發(fā)生一定程度的分化現(xiàn)象。降低pH、Ca2+的含量和溫度等,均利于表皮細胞生長。向培養(yǎng)基中加氫化可的松( 10 μg/ml )、10-10 的霍亂毒素、10M-6 的異丙基腎上腺素(Isopro-terenol)和10 ng/mI 促表皮生長因子(EGF)能促表皮細胞生長。
方法:
皮膚是皮表細胞培養(yǎng)來源,小兒包皮是皮膚表皮細胞培養(yǎng)的好材料。全皮培養(yǎng)時,表皮細胞與成纖維細胞混合生長,難以純化。黑木登志夫(1981)用皮膚表皮和真皮分離培養(yǎng)法可獲純上皮細胞,有一定參考價值,其法如下:
通過80 目不銹鋼紗網濾過后,低速離心,吸上清,直接加入Eagle液和 20 %小牛血清,制成細胞懸液,接種入碟皿中,CO2溫箱培養(yǎng)。
注意事項:
冷消化目的在于使表皮和真皮結合松散,如冷消化后分離下來的表皮膜自身也已松散,此時亦可直接置入PBS中用吸管吹打制備細胞懸液;不再經過第二次消化。
其他:
皮膚表皮培養(yǎng)亦可用全皮消化法或組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)。用膠原酶消化為好,它對結締組織有較強消化作用,對表皮細胞損傷小,但成纖維細胞易與上皮細胞同時生長,在這種情況下,需做排除成纖維胞處理。血清中含有血小板來源的生長因子(PDGF),易促成纖維細胞的生長;如用好的、不含PDGF的無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)可能更好。
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