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色譜基礎(chǔ)知識(shí)
色譜技術(shù)是一種廣泛應(yīng)用于化學(xué)分析的分離方法,通過(guò)樣品在固定相和流動(dòng)相之間的分配差異,實(shí)現(xiàn)混合物中各組分的分離和檢測(cè)。以下是色譜技術(shù)的基本概念和分類(lèi),以及其應(yīng)用領(lǐng)域的簡(jiǎn)介。
色譜技術(shù)的基本概念
1、固定相
固定相是色譜系統(tǒng)中用于吸附或分配樣品組分的材料,可以是固體或液體,通常涂覆在支持介質(zhì)上。固定相的特性決定了分離的選擇性。
2、流動(dòng)相
流動(dòng)相是帶動(dòng)樣品通過(guò)固定相的液體或氣體,樣品組分在流動(dòng)相和固定相之間分配,形成不同的滯留時(shí)間,從而實(shí)現(xiàn)分離。
3、保留時(shí)間保留時(shí)間
樣品組分從進(jìn)樣到被檢測(cè)到所需的時(shí)間,用于表征不同組分的分離行為。
4、分離機(jī)制
樣品分離主要基于以下機(jī)制之一或組合:
吸附作用
分配作用
離子交換
分子排阻
色譜的分類(lèi)
根據(jù)操作模式和分離原理,色譜技術(shù)主要分為以下幾類(lèi):
1、按流動(dòng)相分類(lèi)
氣相色譜:
以氣體為流動(dòng)相,適合揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性樣品。
液相色譜:
以液體為流動(dòng)相,適合不揮發(fā)或熱不穩(wěn)定樣品。
2、按固定相分類(lèi)
柱色譜:
固定相填充在色譜柱中,是最常見(jiàn)的形式。
薄層色譜:
固定相涂覆在玻璃板或塑料片上,適合快速篩查。
3、按分離機(jī)制分類(lèi)
分配色譜:
利用樣品在流動(dòng)相和固定相間的溶解性差異。
吸附色譜:
利用樣品分子與固定相表面吸附能力的不同。
離子交換色譜:
利用樣品離子與固定相離子交換能力的差異。
凝膠色譜:
根據(jù)分子大小差異進(jìn)行分離,也稱(chēng)分子篩色譜。
液相色譜(HPLC)的知識(shí)
HPLC 是現(xiàn)代液相色譜的技術(shù),使用高壓泵驅(qū)動(dòng)流動(dòng)相,固定相通常是填充在色譜柱中的顆粒材料。
1、主要組件
泵:提供高壓流動(dòng)相輸送。
進(jìn)樣器:用于準(zhǔn)確控制樣品的進(jìn)樣量。
色譜柱:包含固定相,用于分離樣品。
檢測(cè)器:檢測(cè)經(jīng)過(guò)色譜柱后的樣品組分,常見(jiàn)類(lèi)型有UV、熒光、質(zhì)譜等。
2、分離模式
正相色譜:固定相極性高,流動(dòng)相極性低,適合非極性化合物分離。
反相色譜:固定相極性低(如C18柱),流動(dòng)相極性高,適合極性化合物分離。