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細(xì)胞克隆篩選系統(tǒng)的加藥時間和維持濃度的確定方法
細(xì)胞克隆篩選系統(tǒng)是新一代細(xì)胞克隆篩選和挑取技術(shù)，細(xì)胞克隆篩選系統(tǒng)能夠更少時間里，自動化篩選并挑取更高水平表達(dá)的細(xì)胞克隆，擁有5組熒光通道，可以同時使用3組，細(xì)胞克隆篩選系統(tǒng)避免有限稀釋，快速篩選挑取雜交瘤克隆，建立穩(wěn)定細(xì)胞株，干細(xì)胞及特殊表面標(biāo)記細(xì)胞挑取及昆蟲細(xì)胞篩選挑取。
細(xì)胞克隆篩選系統(tǒng)的加藥時間和維持濃度的確定方法：
1，由于基因轉(zhuǎn)染到細(xì)胞內(nèi)之后要一段時間才能表達(dá)出蛋白質(zhì)。所以篩選不能太早；但是也不能太晚，因為轉(zhuǎn)染了外源基因的細(xì)胞代謝負(fù)荷較大，增值較慢，時間長了就會被沒有外源基因轉(zhuǎn)入的細(xì)胞所淹沒，導(dǎo)致篩選不出陽性克隆，一般要在轉(zhuǎn)染24小時之后才開始加G418篩選。隨著細(xì)胞的代謝G418的濃度和活性都回下降，所以每3~5天都要更換一次含有G418的篩選液。這時藥物濃度可以降至200ug/ml。
2，加抗生素的時機，主要是考慮插入到細(xì)胞基因組的抗性基因是否已經(jīng)得到表達(dá)。一般是轉(zhuǎn)染48小時后加入抗生素。挑出單克隆后就可以用維持濃度，一般是篩選濃度的1/2。關(guān)于維持濃度，有人說細(xì)胞會出現(xiàn)對抗生素的抗性，應(yīng)不斷提高其濃度。而且，如果你要挑選到幾個陽性克隆中較高表達(dá)的克隆的話，可以調(diào)整抗生素的濃度。當(dāng)然，抗性基因高表達(dá)，目的基因不一定就跟著高表達(dá)。
細(xì)胞克隆篩選系統(tǒng)的有限稀釋法是目前常用的一種常規(guī)方法，這種方法篩選細(xì)胞的好處就是基本上不會傷害細(xì)胞。整個過程中細(xì)胞所經(jīng)歷的，也僅僅是在移液槍頭中的短暫停留，因此幾乎是零損傷。不過，這種方法的弊端也是顯而易見，就是效率問題。