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測(cè)定蛋白質(zhì)的構(gòu)型和功能要用什么儀器，有哪些步驟！
閱讀：1216 發(fā)布時(shí)間：2022-12-2
構(gòu)型這個(gè)概念是指一個(gè)有機(jī)分子中各個(gè)原子*的固定的空間排列。這種排列不經(jīng)過(guò)共價(jià)鍵的斷裂和重新形成是不會(huì)改變的。構(gòu)型的改變往往使分子的光學(xué)活性發(fā)生變化。蛋白質(zhì)的構(gòu)型就是一級(jí)結(jié)構(gòu)，指其氨基酸排列順序。
測(cè)定蛋白質(zhì)的構(gòu)型的主要有兩種方法：Edman降解（Edman degradation）和質(zhì)譜法。
EDMAN降解法測(cè)序是經(jīng)典的方法，通過(guò)從多肽鏈游離的N末端（或者C末端，但是很少）測(cè)定氨基酸殘基的序列的過(guò)程。N末端氨基酸殘基被苯異硫氰酸酯修飾，然后從多肽鏈上切下修飾的殘基，現(xiàn)在一般都是自動(dòng)測(cè)序儀。
質(zhì)譜法測(cè)蛋白只要是利用生物質(zhì)譜儀，比如ESI-Q-TOF，ESI-IT-Obitraq。利用特異的酶將蛋白切成肽段，然后通過(guò)質(zhì)譜方法進(jìn)行測(cè)定，產(chǎn)生數(shù)據(jù)或通過(guò)重頭比對(duì)，或者通過(guò)生物信息學(xué)中數(shù)據(jù)庫(kù)搜索的方法推斷出肽段序列，然后再由肽段序列拼接處蛋白序列。這種方法是近些年來(lái)隨著蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展而廣泛被使用，但是對(duì)于蛋白完整序列測(cè)定需要較強(qiáng)的生物信息學(xué)技術(shù)。
整體而言，EDMAN降解法準(zhǔn)確，但是耗時(shí)長(zhǎng)，而且對(duì)于所測(cè)定的肽段要求很高，不能太長(zhǎng)，不能太難修飾等等，一般能測(cè)個(gè)20-50堿基不錯(cuò)了。而質(zhì)譜法方法快速，但是準(zhǔn)確性比EDMAN降解法略差。
另外，樓主講的蛋白功能測(cè)定，不同的蛋白質(zhì)功能各異，蛋白功能主要通過(guò)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)反復(fù)驗(yàn)證次得到，這個(gè)比較復(fù)雜，沒(méi)有固定的模式，要逐一研究。
另外，像核磁儀可以用來(lái)研究蛋白的構(gòu)象或者說(shuō)晶體結(jié)構(gòu)，表面等離子共振儀器可以用來(lái)研究蛋白蛋白相互作用，等等，蛋白質(zhì)是未來(lái)有限的生物研究資源，現(xiàn)在對(duì)蛋白質(zhì)的研究熱情都很高。也有許多相關(guān)的基礎(chǔ)科教書(shū)，樓主感興趣可以去看看。