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快速了解如何精準(zhǔn)測(cè)試核酸熱解鏈溫度

時(shí)間:2022-3-31 閱讀:1047
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核酸研究  


在核酸研究領(lǐng)域,天然的功能核酸(如各種miRNA、IncRNA以及shRNA等)和人工篩選的功能核酸(如脫氧核酶、核酶及適配體等)不斷被發(fā)現(xiàn)或篩選出來(lái)。在基因功能研究、藥物發(fā)現(xiàn)、生物傳感器探針等領(lǐng)域的應(yīng)用研究越來(lái)越多,尤其是核酸藥物(如反義核酸、小干擾RNA等)的陸續(xù)上市,使得核酸成為當(dāng)前生命科學(xué)和藥物研究的熱點(diǎn)之一。而核酸的高級(jí)結(jié)構(gòu)是其行使這些功能的物質(zhì)基礎(chǔ),因此高級(jí)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性是核酸應(yīng)用中需要考慮的至關(guān)重要的因素。對(duì)于核酸這類的較大的分子藥物,紫外光譜是研究其結(jié)構(gòu)變化的可行且簡(jiǎn)單的方法。  


核酸結(jié)構(gòu)的特性  

1  核酸結(jié)構(gòu)隨溫度的變化是可逆的,且不會(huì)使核酸變性。在一定的溶液條件下,一個(gè)核酸序列依賴氫鍵和靜電作用在低溫形成特定的高級(jí)結(jié)構(gòu),芳香性堿基發(fā)生堆積,產(chǎn)生減色效應(yīng),導(dǎo)致紫外吸收值降低。  

2  當(dāng)溫度升高時(shí),氫鍵和堿基堆積等弱相互作用被逐漸破壞,紫外吸收值逐漸升高。因此,配備溫度控制的紫外光譜儀非常適合研究核酸結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。  

3  隨溫度的升高或者降低,當(dāng)核酸的紫外吸收值達(dá)到高值的一半時(shí),所對(duì)應(yīng)的溫度被定義為核酸的熔點(diǎn),用Tm表示。Tm的大小反應(yīng)核酸結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性的高低。當(dāng)Tm值越大,核酸的高級(jí)結(jié)構(gòu)越穩(wěn)定。  


基于以上特性,控溫型紫外光譜儀在核酸結(jié)構(gòu)研究中能發(fā)揮獨(dú)一無(wú)二的作用。  

Cary3500UV-Vis分光光度計(jì)可搭配多種不同配置的控溫附件,并為核酸研究用戶帶來(lái)精準(zhǔn)的測(cè)試結(jié)果。儀器采用了獨(dú)家的空冷控溫技術(shù),升溫速率可以從0.1℃/min到40℃/min,不僅能夠分辨核酸高級(jí)結(jié)構(gòu)變化中的多種形態(tài),同時(shí),一體化的附件設(shè)計(jì)理念也可避免傳統(tǒng)水控溫裝置繁雜的管線和工作噪聲。  


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本白皮書(shū)中系統(tǒng)的介紹了安捷倫帶控溫附件的Cary3500UV-Vis分光光度計(jì)在核酸Tm檢測(cè)應(yīng)用中的完整解決方案。從樣品的前期處理到比色皿的選擇,從升溫速率的研究到測(cè)試過(guò)程中的注意事項(xiàng),用戶都可在白皮書(shū)中找到相應(yīng)的答案。  

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