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安捷倫2D-LC液相色譜中藥/天然產(chǎn)物應(yīng)用快報（下篇）
安捷倫始終致力于 2D-LC 等新技術(shù)的投入和研發(fā)，創(chuàng)造出更為先進(jìn)的色譜分離技術(shù)并不斷改寫歷史。選擇安捷倫 2D-LC，讓您的實(shí)驗(yàn)室獲得分離能力更強(qiáng)、更靈活、更易用的二維液相色譜分離方案。
安捷倫 2D-LC 主要提供兩種不同的分離模式：中心切割 2D-LC 和全二維液相（LCxLC）。其中，中心切割 2D-LC 又包含（多）中心切割（MHC）和高分辨率采樣（HiRes）模式：
（多）中心切割（MHC）
將一個或多個感興趣的峰貯存，隨后在第二維中進(jìn)一步分析。
高分辨率采樣（HiRes）
將某個感興趣的峰進(jìn)行多次切割并比較不同位置的結(jié)果，例如用于獲得可靠的定量結(jié)果。
全二維液相（LCxLC）
將全部一維分離的流出物以等量的方式切割并全部進(jìn)入第二維分析，從而獲得更全面的結(jié)果。
安捷倫 2D-LC 解決方案可幫助您分離共洗脫化合物并實(shí)現(xiàn)最高的峰容量。在需要提高分離度時，可以利用中心切割和高分辨率采樣，或利用全二維液相色譜分離復(fù)雜混合物。使用二維液相色譜使待測物與不揮發(fā)的緩沖鹽分離且與 MS 檢測兼容：
2D-LC 的主要應(yīng)用優(yōu)勢
中藥/天然產(chǎn)物因其自身的復(fù)雜特性，在分離測定時，要求儀器不僅要能實(shí)現(xiàn)對中藥及天然產(chǎn)物的簡單化學(xué)成分及組成分析，還要實(shí)現(xiàn)對同品種中藥的化學(xué)聚類及溯源分析、正品與混淆品的特征差異性分析以及復(fù)方組成及代謝分析。而二維液相色譜技術(shù)在中藥質(zhì)量研究中的應(yīng)用，實(shí)現(xiàn)了新型液相色譜技術(shù)在中藥分析中的突破性應(yīng)用，全面且有效地提升了上述中藥/天然產(chǎn)物分析的水平。
安捷倫二維液相色譜解決方案，以性能優(yōu)異的液相色譜硬件、二維控制/采集軟件為基礎(chǔ)，全面實(shí)現(xiàn)全二維液相色譜（2D-LC）、（多）中心切割二維液相色譜分析和高分辨率采樣分析；同時，安捷倫二維液相色譜系統(tǒng)也全面兼容安捷倫質(zhì)譜系統(tǒng)，質(zhì)譜系統(tǒng)軟件可完全控制二維系統(tǒng)以實(shí)現(xiàn)全部二維功能。這使二維系統(tǒng)不僅可在需要時提高分離度解決復(fù)雜的分離問題，也可以同時獲得質(zhì)譜相關(guān)定性定量結(jié)果，實(shí)現(xiàn)分離和定性一次完成，符合中藥/天然產(chǎn)物快速、準(zhǔn)確分析的要求。
ZhangPeng Shang, Lulu Xu, Yao Xiao 等在 2021 年發(fā)表于《Journal of Chromatography A》的文章《A global profiling strategy using comprehensive two-dimensional liquid chromatography coupled with dual-mass spectrometry platforms: Chemical analysis of a multi-herb Chinese medicine formula as a case study》中，通過使用安捷倫 1290/1290 2D-LC 對含有 11 味中藥的小兒肺熱咳喘顆粒中的成分進(jìn)行分離，對比 UV 和雙質(zhì)譜檢測器平臺的檢測數(shù)據(jù)，最終在 46 分鐘內(nèi)鑒定了 108 種化合物及額外的 151 種化合物。2D-LC 和雙質(zhì)譜檢測器相結(jié)合，構(gòu)建了一種用于多組分全局分析的普適性強(qiáng)大分析平臺。
2D-LC 和雙質(zhì)譜系統(tǒng)的工作流程策略
A. Acquaviva, G. Siano等在 2020 年發(fā)表于《Journal of Chromatography A》的文章《Chiral × achiral multidimensional liquid chromatography. Application to the enantioseparation of dintitrophenyl amino acids in honey samples and their fingerprint classification》，使用了配有 2 位 /8 通閥的安捷倫 1290 Infinity II 2D-LC 系統(tǒng)的全二維（LC×LC）分離模式，構(gòu)建了基于手性分離×反相的分離系統(tǒng)，對蜂蜜樣品中氨基酸的分離進(jìn)行了優(yōu)化（包括影響峰容量的關(guān)鍵參數(shù)如正交性、采樣頻率等），最終鑒定出不同蜂蜜樣品中存在的不同氨基酸種類。僅需通過簡單的構(gòu)建，即可實(shí)現(xiàn)多維液相色譜在分離復(fù)雜樣品時，提高峰容量的目標(biāo)。這是首次將全二維 2D-LC（LC×LC）應(yīng)用于復(fù)雜天然樣品中氨基酸的對映體分離。
全二維 2D-LC（LC×LC）系統(tǒng)的模塊配置和流路圖
綠色框代表第一維，橙色框代表第二維
優(yōu)化 12 個化合物在最佳色譜條件下，苯基 (A)和 C18(B) 色譜柱中 DNP- 氨基酸的手性×非手性分離等線圖
沈燦杰、馬陽等在 2022 年發(fā)表于《中草藥》的文章《多中心切割二維液相色譜法同時測定九味熄風(fēng)顆粒中 10 種成分》中，使用了配以雙 2 位 /4 通閥的安捷倫 Infinity 1290II 2D-LC 系統(tǒng)的多中心切割模式（MHC），對由天麻、熟地黃、鉤藤等 9 味藥材組成的九味熄風(fēng)顆粒中次黃嘌呤、天麻素等 10 種成分進(jìn)行了測定，建立了含量測定方法。由于九味熄風(fēng)顆粒中 10 種成分極性與含量差異大，使用傳統(tǒng)一維色譜時，不同類型的色譜柱均難以達(dá)到目標(biāo)物的全部分離。而使用 2D-LC 系統(tǒng)多中心切割模式（MHC），選擇性的將第一維中難以分離的目標(biāo)組分切割至第二維色譜中，從而實(shí)現(xiàn) 10 種組分的全部定量分析，系統(tǒng)方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明本法的專屬性、穩(wěn)定性、重復(fù)性、準(zhǔn)確度均較好，2D-LC 的分離能力明顯優(yōu)于一維液相。
多中心切割（MHC）二維液相系統(tǒng)連接示意圖
1-次黃嘌呤 2-天麻素 3-原兒茶酸 4-新綠原酸 5-綠原酸 6-馬錢苷酸 7-隱綠原酸 8-獐芽菜苦苷 9-龍膽苦苷 10-當(dāng)藥苷
混合對照品 (A) 和 JXG 樣品 (B) 的一維 (1D) 和二維 (2D) 分離色譜圖