多肽藥物的發(fā)展由來已久，也是目前新藥研發(fā)領(lǐng)域備受矚目的熱門方向，包含合成多肽和重組多肽產(chǎn)品。大多數(shù)多肽藥物通過固相多肽合成法進(jìn)行生產(chǎn)。化學(xué)合成多肽相關(guān)雜質(zhì)可能來自原輔料、生產(chǎn)過程，或者在生產(chǎn)或儲(chǔ)存過程中因降解而產(chǎn)生。

隨著多肽藥物研究技術(shù)的提高和相關(guān)法規(guī)的完善，藥審中心于今年 2 月發(fā)布了《化學(xué)合成多肽藥物藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》^[1]，提出化學(xué)合成多肽藥物藥學(xué)研究的一般性技術(shù)要求。尤其在指導(dǎo)原則中制定了肽相關(guān)雜質(zhì)的報(bào)告限、鑒定限和質(zhì)控限，使得多肽有關(guān)物質(zhì)的分離得到了更高的關(guān)注。肽相關(guān)雜質(zhì)由于與目標(biāo)分子結(jié)構(gòu)相關(guān)，因此在日常方法開發(fā)過程中通常有著極大的挑戰(zhàn)。

增強(qiáng)型方法提供了一套系統(tǒng)的方法來開發(fā)和完善分析方法，開發(fā)流程會(huì)考慮多個(gè)變量（因素）之間的相互影響。通過增強(qiáng)型方法可以建立穩(wěn)定耐用的多肽雜質(zhì)分析方法（ICH Q14，Enhanced Approach）^[2]。利用 Agilent 方法開發(fā)系統(tǒng)，有助于進(jìn)行多肽有關(guān)物質(zhì)分析的多因素多變量分析方法開發(fā)。

在方法篩選時(shí)，首先利用色譜柱選擇性和流動(dòng)相選擇性差異，組合進(jìn)行方法初篩，確定初步方法。針對(duì)多肽：建議初始有機(jī)相流動(dòng)相為乙腈，流動(dòng)相 B 必要時(shí)從乙腈換成甲醇或乙腈甲醇混合；三氟乙酸（TFA）因?yàn)榭梢砸种粕V柱固定相硅膠表面的硅醇基，改善分離，所以 0.1% TFA 水溶液作為水相流動(dòng)相而常見。隨著色譜柱封端技術(shù)的成熟，流動(dòng)相 A 必要時(shí)也可考慮緩沖鹽體系，同時(shí)對(duì)鹽類型和濃度進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化。初始方法確定后，再對(duì)溫度和梯度的進(jìn)行組合優(yōu)化，必要時(shí)再進(jìn)行 pH 的精細(xì)篩選。

從上述方法開發(fā)工作流程可以看出，色譜柱選擇性會(huì)極大程度影響到初步方法的確定。因此一個(gè)合適的色譜柱組合可幫助簡化方法開發(fā)。我們列出了日常安捷倫工程師在實(shí)驗(yàn)方法開發(fā)過程中所涉及的色譜柱組合。這些精心挑選過的色譜柱，可以支持多肽客戶在日常大部分有關(guān)物質(zhì)方法開發(fā)中的工作。安捷倫色譜柱按照行業(yè)嚴(yán)格的質(zhì)量控制規(guī)范制造而成，具有可重現(xiàn)的可靠性能。