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雙劍合璧，智創(chuàng)未來丨安捷倫 Online 2D-LC 液相系統(tǒng)在治療性抗體藥物生產(chǎn)過程中的智慧應(yīng)用
實驗室的小伙伴們，應(yīng)當對安捷倫提供的各種液相高端應(yīng)用方案很熟悉了吧？多維液相色譜系統(tǒng)、全自動方法開發(fā)系統(tǒng)、超高效液相色譜系統(tǒng)、在線液相色譜系統(tǒng)等等，這些已經(jīng)足夠讓大家在實驗室細細品味。2025 新年伊始，已經(jīng)過 50 多年磨礪與創(chuàng)新的安捷倫液相色譜產(chǎn)品，又給我們帶來了全新的解決方案——Online 2D-LC 聯(lián)用方案！今天滿足你的好奇心，讓我們趕緊啟程，一睹為快！
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2D-LC 液相應(yīng)用于 mAbs 的滴度和聚集體分析
在單克隆抗體生產(chǎn)過程中，常用體積排阻色譜（SEC）技術(shù)監(jiān)控 mAb 聚集體，這是 mAb 的關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQA）之一，因為聚集體會影響 mAb 的藥效、穩(wěn)定性和安全性。然而直接從細胞發(fā)酵液（HCCF）進行聚集體分析存在很大挑戰(zhàn)，因為 HCCF 的基質(zhì)特別復(fù)雜。為了克服這個問題，在 SEC 分析之前，需要用 protein A（ProtA）來純化 mAb，同時也可以測定 mAb 的濃度（Titer）。這個過程通常需要花費 2-5 h。而當使用 Agilent 1290 Infinity III 2D-LC 系統(tǒng)時，一針進樣 15 min 之內(nèi)即可分析發(fā)酵液或者細胞培養(yǎng)基中 mAb 的 Titer 和聚集體[1]（圖 1 和圖 2）。
圖 1. 2D-LC 進行 Titer 和 SEC 分析過程
圖 2. 2D-LC 分析 mAb 的 Titer（1D Protein A）和聚集體（2D SEC）的色譜圖
Online LC 液相應(yīng)用于 mAbs 下游連續(xù)流純化過程中 CQA 實時監(jiān)控
安捷倫 Online LC 液相色譜系統(tǒng)作為過程分析技術(shù)（PAT）的一種高效分析工具，可實現(xiàn)生物制藥的上游生產(chǎn)過程和下游純化過程監(jiān)控，是連續(xù)制造工藝過程的最佳拍檔，同時也適用于批次生產(chǎn)過程的在線監(jiān)控（圖 3）。
圖 3. 安捷倫 Online LC 解決方案
在 mAbs 下游連續(xù)流純化過程中需要實時監(jiān)控聚集體和電荷異構(gòu)體，選擇帶四柱切換閥的 Online LC 系統(tǒng)可實現(xiàn)每間隔一定時間從純化液中自動取樣、在線過濾后分別進行 SEC 和 IEC 的在線分析。同時將 Online LC 作為下游連續(xù)流純化平臺的一部分，可實現(xiàn)對純化工藝過程的自動優(yōu)化[2]，整體框架如圖 4：
圖 4. 下游連續(xù)流純化在線監(jiān)控的整體框架示意圖
Online 2D-LC 液相應(yīng)用于 mAbs 生產(chǎn)過程中 CQA 實時監(jiān)控
將上文中 2D-LC 和 Online LC 技術(shù)整合可得到 Online 2D-LC 系統(tǒng)，即通過 Online LC 將生產(chǎn)過程中的 mAbs 樣品自動傳輸、前處理和進樣[3]，然后通過 2D-LC 將 mAb 樣品實現(xiàn)一維 Titer（圖 5）和二維 SEC/IEC 分析（圖 6）[4]。該系統(tǒng)可應(yīng)用于 mAbs 上游生產(chǎn)過程和下游純化過程中，得到更多實時 mAbs 的 CQA 數(shù)據(jù)，也為工藝參數(shù)優(yōu)化提供更多的參考。
圖 5. Agilent Online LC monitoring software 軟件中顯示一維 Titer 的變化圖：藍色曲線對應(yīng) 2D 為 SEC 的 Titer 圖；紫色曲線對應(yīng) 2D 為 IEC 的 Titer 圖
圖 6. Agilent Online LC monitoring software 軟件中二維的趨勢圖：藍色曲線對應(yīng) 2D 為 SEC 的趨勢圖；紫色曲線對應(yīng) 2D 為 IEC 的趨勢圖
結(jié)語
Online 2D-LC 系統(tǒng)可精準實現(xiàn)在線分析、二維和分析項目自動切換等功能，而且還有強大的色譜軟件 OpenLab CDS、Online LC monitoring software 和 DCS 軟件的加持，使我們對在抗體藥物的生產(chǎn)過程中的產(chǎn)品情況了如指掌。新年新旅程，如此輕松高效的工作流程，舍我其誰！
參考文獻
[1] Bian Yulan. Coupling Affinity and Size Exclusion Chromatography in the Monoclonal Antibody Study Using the Agilent Infinity II 2D-LC System , AN：5994-3530EN, 2021.
[2] 張婷婷, 周影, 楊新磊, 陳波，程歡，錢天樂. Agilent InfinityLab 在線液相色譜應(yīng)用于生物制藥mAbs 下游連續(xù)流純化工藝過程監(jiān)控, AN：5994-7964ZHCN, 2024.
[3] Edgar Naegele, Daniel Kutscher, Lea Bonnington, Michael Leiss, and Andrés Martinez. Online LC Monitoring of Downstream Processing in the Production of Therapeutic mAbs, AN：5994-5186EN, 2022.
[4] Edgar Naegele. Multiple Critical Quality Attributes Assessment of mAbs for Process Control, AN：5994-5318EN, 2022.