磁珠提取實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光染料或熒光集團(tuán)，利用熒光信號來實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，然后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板濃度進(jìn)行定量分析。

 

　　磁珠提取實(shí)時(shí)熒光定量PCR在PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，通過對擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實(shí)時(shí)檢測。

 

　　傳統(tǒng)的PCR進(jìn)行檢測時(shí)，擴(kuò)增反應(yīng)后需要進(jìn)行染色處理及電泳分離，并且只能作定性分析，不能準(zhǔn)確定量，易造成污染出現(xiàn)假陽性，使其應(yīng)用受到限制。實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了對模板的定量，且具有靈敏度高、特異性和可靠性更好、自動(dòng)化程度高和*的特點(diǎn)，使得熒光定量PCR逐漸取代常規(guī)PCR。

 

　　應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法同時(shí)輔助病原分離、序列測定等手段，能夠及時(shí)、準(zhǔn)確的對疾病作出診斷。實(shí)驗(yàn)室對檢測的方法的更新與改進(jìn)持續(xù)進(jìn)行，例如多重?zé)晒舛縋CR檢測方法建立等，以期更好的為養(yǎng)殖場服務(wù)。

 

　　引物設(shè)計(jì)：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，通過熒光信號不斷累積而實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)監(jiān)測PCR全程，然后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。在實(shí)時(shí)熒光定量PCR中，對全程PCR擴(kuò)增過程進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測，根據(jù)反應(yīng)時(shí)間和熒光信號的變化可以繪制成一條曲線。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀應(yīng)安放在濕度較低、灰塵較少、遠(yuǎn)離水池的平穩(wěn)臺面上，不能有強(qiáng)光直射，室內(nèi)應(yīng)通風(fēng)良好，無腐蝕性氣體。

 

　　而普通pcr引物設(shè)計(jì)：為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地?cái)U(kuò)增模板DNA序列。引物應(yīng)用核酸系列保守區(qū)內(nèi)設(shè)計(jì)并具有特異性。產(chǎn)物不能形成二級結(jié)構(gòu)。引物長度在15～30堿基之間。