實時熒光定量PCR擴增是指在PCR反應體系中加入熒光染料或熒光集團，利用熒光信號來實時監(jiān)測整個PCR進程，然后通過標準曲線對未知模板濃度進行定量分析。
病原學檢測是動物疾病確診的關鍵點，而聚合酶鏈式反應（PCR）是目前病原檢測的常用的分子生物學技術，具有高敏感性的特征。PCR技術發(fā)展已日趨完善，并在此基礎上建立了實時熒光定量PCR、套式、多重、降落PCR等技術，逐漸成為實驗室常規(guī)檢測手段。
實時熒光定量PCR擴增是指在PCR擴增反應體系中加入熒光基團，通過對擴增反應中每一個循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實時檢測，然后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光信號指數(shù)擴增階段，PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系，可以選擇在這個階段進行定量分析。為了方便定量和比較，在實時熒光定量PCR技術中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和CT值。
熒光定量PCR的分類：
分為核酸染料法和探針法。核酸染料法實驗設計簡單，不需要設計探針，僅需要一對引物，但是核酸染料法對雙鏈的結(jié)合并沒有特異性，容易使實驗結(jié)果出現(xiàn)假陽性信號。
動保站全部采用探針法，此方法只有與探針結(jié)合的片段上發(fā)生擴增才能收集到熒光信號，增加了反應的特異性；另外如果對探針的5’端采用不同的熒光標記就可以進行多重熒光定量PCR。
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