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選擇熒光PCR擴增儀可以從哪些方面考慮

閱讀:596      發(fā)布時間:2022-11-4
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  PCR,是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于擴增特定的DNA片段,這種方法可在生物體外進行,不必依賴大腸桿菌或酵母菌等生物體。PCR這項技術(shù),被廣泛地運用在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)的實驗室。
  熒光PCR擴增儀是分子診斷實驗室的重要工具,直接影響臨床檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、甚至工作效率。熒光PCR儀器品牌的選擇,是實驗室質(zhì)量保證的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
  依據(jù)PCR儀工作原理選擇機型
  熱模塊:
  由于PCR擴增儀器為96個樣本同時進行擴增和檢測,每個檢測孔的溫控一致是理想狀態(tài)。不同PCR擴增儀的升降溫原理不同,如壓縮機、半導(dǎo)體或空氣傳導(dǎo),升降溫速度差異較大。有的PCR儀器由多個加熱模塊拼接,長期使用后容易出現(xiàn)某一個加熱模塊損壞,給臨床報告帶來麻煩。臨床檢測不單單有質(zhì)量要求,有時容不得報告的拖延,因此選擇整體加熱模塊和故障率的儀器,也是提升實驗室質(zhì)量的因素之一。
  光學(xué)模塊:
  PCR擴增信號的采集,是熒光PCR儀器定量的靈魂,決定了96個樣本孔間信號采集的均一性。從擴增管上部采集熒光信號的方式,由于經(jīng)過管蓋和空氣部分,容易導(dǎo)致熒光信號衰減或折射,不同核酸濃度的擴增效率易產(chǎn)生差異,而側(cè)面采集熒光信號儀器,則能有效避免上部熒光采集存在的缺陷,獲得顏值較高的擴增曲線。
  軟件系統(tǒng)
  計算機對每個擴增熒光信號進行擬合,依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出檢測樣本的結(jié)果,分析基線的設(shè)置原則以擴增曲線熒光值的5%為準(zhǔn),這恰好是PCR擴增儀容易產(chǎn)生噪音的位置,因此軟件具有依據(jù)整體擴增趨勢進行優(yōu)化的功能顯得尤為重要,從而使獲得的熒光曲線趨于光滑,而得出重復(fù)性較好的結(jié)果。對擴增效率較差的PCR試劑盒,如果在沒有曲線優(yōu)化功能的PCR儀上擴增,將獲得顏值極差的擴增曲線,甚至無法判斷結(jié)果,針對這一情況,有些試劑廠家針對不同的PCR儀器制作相應(yīng)的試劑盒。

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