雙軸力學(xué)刺激椎間盤(pán)細(xì)胞

                                                  MchanoCulture B1應(yīng)用舉例：雙軸力學(xué)刺激椎間盤(pán)細(xì)胞

 CellScale生物力學(xué)設(shè)備細(xì)胞牽張拉伸儀

MechanoCulture B1用于為細(xì)胞培養(yǎng)物提供多軸拉伸刺激。在這項(xiàng)研究中，刺激小鼠椎間盤(pán)（IVD）細(xì)胞以研究基因表達(dá)的變化。

椎間盤(pán)（IVD）是復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，對(duì)于脊柱穩(wěn)定、承重和運(yùn)動(dòng)至關(guān)重要。它由三個(gè)截然不同但相互依存的組織組成：中央髓核（NP）、纖維外環(huán)（AF）和錨定于椎骨的軟骨終板。盡管生理負(fù)荷對(duì)椎間盤(pán)穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要，并刺激增加的細(xì)胞外基質(zhì)合成，但過(guò)度負(fù)荷會(huì)引起一系列不可逆的反應(yīng)。

細(xì)胞介導(dǎo)的反應(yīng)導(dǎo)致組織結(jié)構(gòu)和功能的破壞。機(jī)械負(fù)荷對(duì)IVD不同細(xì)胞類(lèi)型的作用之間的差異了解甚少，調(diào)節(jié)這些反應(yīng)的細(xì)胞途徑也是如此。使用高密度微團(tuán)細(xì)胞培養(yǎng)物培養(yǎng)原代小鼠IVD細(xì)胞可以維持AF表型。使用MechanoCulture B1設(shè)備將細(xì)胞暴露于環(huán)狀多軸應(yīng)變后，這種細(xì)胞培養(yǎng)策略可用于獲取AF細(xì)胞基因表達(dá)的變化。

力學(xué)刺激

初始接種后二十四小時(shí)，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行機(jī)械加載。該協(xié)議是在1 Hz下雙軸拉伸膜30分鐘，10％應(yīng)變。作為對(duì)照，使用無(wú)菌膜將用于對(duì)照的樣品用無(wú)菌鑷子轉(zhuǎn)移至6 cm細(xì)胞培養(yǎng)皿中，并進(jìn)行同樣的預(yù)處理和接種。這些對(duì)照樣品可使用戶能夠監(jiān)控比較細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞活力和形態(tài)。

刺激后第6和24小時(shí)收獲培養(yǎng)物用于RNA提取和基因表達(dá)分析。在拉伸序列之后，拉伸組件被拆開(kāi)。小心地將膜從固定銷(xiāo)上取下，并放入6cm的培養(yǎng)皿中。立即使用相差顯微鏡對(duì)活細(xì)胞的形態(tài)進(jìn)行成像。為了收獲細(xì)胞，將1mL PBS直接添加到膜的頂部，并使用細(xì)胞刮刀分離細(xì)胞。將PBS中的細(xì)胞離心以獲得細(xì)胞沉淀。隨后將細(xì)胞沉淀物懸浮在1mL Trizol中，用于隨后的RNA提取和基因表達(dá)分析。

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