一種檢測(cè)活細(xì)胞中波形蛋白細(xì)胞骨架的非侵入性方法

波形蛋白是間充質(zhì)細(xì)胞中主要的中間絲。此外，波形蛋白作為上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 (EMT) 的生物標(biāo)志物具有重要作用。EMT 是一種高度動(dòng)態(tài)的細(xì)胞過(guò)程，涉及轉(zhuǎn)移和癌癥的起始。波形蛋白在 EMT 誘導(dǎo)后上調(diào)，對(duì)細(xì)胞遷移和侵襲至關(guān)重要。

迄今為止，還沒(méi)有可用于在生理背景下研究?jī)?nèi)源性波形蛋白的方法。Vimentin 融合蛋白的過(guò)表達(dá)會(huì)誘導(dǎo) EMT，因此會(huì)阻礙任何分析。現(xiàn)在，使用新的 Vimentin-Chromobody，您可以對(duì)活細(xì)胞中的內(nèi)源性波形蛋白進(jìn)行實(shí)時(shí)分析。Vimentin-Chromobody 使研究人員能夠研究波形蛋白中間絲的動(dòng)態(tài)組織并研究 EMT。

使用 Vimentin Chromobody 進(jìn)行實(shí)時(shí)可視化

使用 Vimentin-Chromobody 質(zhì)粒，您可以獲得融合到 TagGFP (Evrogen) 的波形蛋白的羊駝抗體序列。轉(zhuǎn)化后，您的細(xì)胞會(huì)表達(dá) Vimentin-Chromobody，并且通過(guò)結(jié)合熒光 Chromobody 可以看到波形蛋白絲。這種結(jié)合不會(huì)影響細(xì)胞活力或細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性，因此為您提供了非侵入性監(jiān)測(cè)細(xì)胞中波形蛋白細(xì)胞骨架的*可能性。

用 pVC-TagGFP2 質(zhì)粒 (Vimentin Chromobody) 轉(zhuǎn)染的 MDCK 細(xì)胞。轉(zhuǎn)染后48小時(shí)固定細(xì)胞，細(xì)胞核用DAPI（藍(lán)色）染色。Vimentin-VHH-TagGFP 突出顯示轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的波形蛋白中間絲（綠色）。

染色體將你的細(xì)胞變成免疫報(bào)告工廠

納米抗體是*的小抗體片段，可與靶蛋白非常有效地結(jié)合。在動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)的納米抗體可以被收集并用于體外

研究。當(dāng)納米抗體被表達(dá)為與 GFP 等報(bào)告分子的融合體時(shí)，發(fā)生了一些意想不到的事情。新形成的 Chromobody 直接與制造它的細(xì)胞內(nèi)的目標(biāo)結(jié)合。此外，使用正確的載體和啟動(dòng)子，結(jié)合具有高特異性和低背景。這為 GFP 與感興趣的蛋白質(zhì)融合提供了一個(gè)非常好的替代方案，用于免疫定位研究。為什么？因?yàn)?GFP 和 RFP 融合已被證明可以阻斷或改變?nèi)诤系鞍椎幕钚浴Ｏ啾戎拢?/span>

駱駝科單域抗體就像類固醇上的 IgG

被稱為駱駝科的動(dòng)物家族（駱駝、美洲駝和羊駝）產(chǎn)生沒(méi)有輕鏈的功能性抗體，即所謂的“重鏈"抗體。這些重鏈抗體通過(guò)單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域識(shí)別并結(jié)合其抗原。當(dāng)從它們的羧基尾部切下時(shí)，這些桶狀結(jié)構(gòu) (2x3 nm) 非常小、天然存在且完整的抗原結(jié)合片段 (MW 為 13 kDa)。這些稱為納米抗體的片段具有高特異性、低納摩爾范圍內(nèi)的親和力和亞納摩爾范圍內(nèi)的解離常數(shù)（通常比小鼠 IgG 好 10 到 100 倍）的特點(diǎn)。納米抗體的緊湊尺寸使其在高達(dá) 70°C 的溫度下極為穩(wěn)定，即使在 2M NaCl 或 0.5% SDS 中也能發(fā)揮作用。這些小而強(qiáng)大的抗體片段可用于各種*的應(yīng)用。他們將打開(kāi)您的研究可能性。