RPPA靶向蛋白組學分析

RPPA靶向蛋白組學分析

靶向蛋白質(zhì)組學-反相蛋白微陣列(Reverse Phase Protein Array, RPPA)技術是一種結合平面高精度大規(guī)模樣品蛋白抗原微陣列打印和抗體檢測的高通量蛋白組學技術，該平臺引進自MD安德森個體化治療中心，具有高通量和高內(nèi)涵雙重優(yōu)勢，可平行分析上千個樣本中幾百種關鍵癌癥蛋白的表達水平及翻譯后修飾。

并作為The Cancer Genome Atlas (TCGA)的核心蛋白組學技術平臺，承擔了33種癌種、超過10000例臨床樣本的數(shù)據(jù)采集與分析工作，其相關研究成果發(fā)表在Nature、Cell、Cancer Cell、New England Journal of Medicine、Nature Biotechnology等學術雜志的高水平論文多達500篇以上。

RPPA技術平臺設計嚴謹精密，流程高度自動化，質(zhì)量控制極其嚴格，每次進行樣品蛋白抗原微陣列打印，都會將多種陽性標準細胞系樣品與待分析樣品一起進行點陣，確保實驗結果的高度可追溯、高度可信度與可重復性。RPPA可在15毫克組織中（米粒大?。┮淮涡苑治龆噙_500種以上不同豐度蛋白，且抗體反應過程及靶點信號采集彼此獨立，避免了不同靶標抗體反應之間的串擾及不同靶標豐度差異較大帶來的信號采集無法兼容的問題，具有其它高通量蛋白組學所五可比擬的超高特異性和靈敏度，可以對大量細胞表面受體蛋白、細胞信號關鍵蛋白及蛋白修飾（磷酸化、乙酰化、甲基化等）、蛋白酶類、轉(zhuǎn)錄因子等各類代表性靶標進行分門別類的系統(tǒng)深度檢測，也可根據(jù)需求定制所需研究的靶點蛋白進行分析，包括直接和間接的上下游蛋白網(wǎng)絡分析。RPPA可應用于蛋白功能與調(diào)控機理分析、細胞信號轉(zhuǎn)導全景掃描、腫瘤標志物及蛋白分子分型、藥物靶標發(fā)現(xiàn)與藥物機理分析等不同領域。  

一、RPPA——源自MD安德森，TCGA的蛋白組學分析策略

二、RPPA技術服務Panel設置

三、RPPA技術服務流程

四、RPPA技術服務特點與優(yōu)勢

1、樣本需求量少

20-40微克蛋白即可實現(xiàn)380靶點檢測，能夠滿足RPPA分析的樣品范圍廣，包括臨床實體瘤手術樣品、穿刺活檢標本、PDX模型樣品、體外培養(yǎng)細胞、3D培養(yǎng)物等都廣泛適用。

2、標準化的樣品處理和分析

蛋白及蛋白修飾位點在蛋白變性后的線性狀態(tài)下檢測，樣本穩(wěn)定性高，消除表位識別中潛在的問題。基于ISO15189質(zhì)量管理體系的標準化技術流程，質(zhì)控嚴格，能夠高效對大樣本平行進行檢測、數(shù)據(jù)分析與評估。

3、靶點獨立檢測，樣本通量高

針對一個檢測靶標，在同一反應微環(huán)境下平行分析100-1000個樣本，樣本通量明顯高于其他蛋白組學技術平臺，而且獨立進行各靶點檢測反應，萬全排除不同靶點間信號串擾問題。

4、不同豐度靶點信號兼容性高

樣品微陣列經(jīng)過精心設計，設立嚴格和全面的多種細胞系樣品對照，每一個樣品(包括待測樣品與對照樣品)都進行系列梯度稀釋，靶點信號進行相對定量，能夠兼顧不同豐度靶點信號，且能夠檢出微小信號差別及低豐度信號，靈敏度高。

5、兼具系統(tǒng)性與靈活性

既能對前期積累的關鍵信號通路與代表性靶標(380種)進行分門別類的系統(tǒng)深度檢測，也可根據(jù)需求定制所需研究的靶點蛋白進行個性化分析，兼具系統(tǒng)性與靈活性。

6、專業(yè)和豐富的RPPA技術服務經(jīng)驗

專業(yè)的技術服務團隊，10年以上RPPA反相蛋白微陣列技術服務經(jīng)驗，國際儀流的實驗室條件和自動化水平，確?？煽康膶嶒灲Y果。可實現(xiàn)一對一的項目方案設計，靈活性強，充分理解實驗需求，從樣本準備開始直到數(shù)據(jù)分析挖掘都由專項人員負責，充分將臨床樣本中能獲得的數(shù)據(jù)信息和臨床病人資料進行關聯(lián)分析。

五、RPPA技術服務應用場景

目前，根據(jù)不同分析需求，RPPA技術服務可以支持以下兩大模式的應用場景。

五、RPPA技術服務應用場景

目前，根據(jù)不同分析需求，RPPA技術服務可以支持以下兩大模式的應用場景。

萬全