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一、實(shí)驗(yàn)介紹
Cell Counting Kit-8(簡(jiǎn)稱CCK-8)試劑可用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。其基本原理為:該試劑中含有WST-8【化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】,它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓(1-Methoxy PMS)的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazan dye)。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。
二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
1.藥物(也包括其他處理方式如放射線照射)對(duì)體外培養(yǎng)的細(xì)胞毒性的測(cè)定;
2.細(xì)胞增殖及細(xì)胞活性測(cè)定。
三、實(shí)驗(yàn)步驟
四、送樣運(yùn)輸要求:
1 凍存細(xì)胞
凍存管寄送前,使用封口膜把凍存管口封嚴(yán)密,凍存管單獨(dú)用自封袋存放。干冰運(yùn)輸。運(yùn)輸時(shí)間在2天以內(nèi)干冰用量在10kg,在2-4天,干冰用量在20kg。
2 活細(xì)胞
使用T25瓶,瓶蓋無孔。
生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞,細(xì)胞密度在30%-40%為宜,寄送前,移去瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)基,添加新培養(yǎng)基至瓶頸部,保留微量空氣,擰緊瓶蓋,并用封口膜密封,瓶身用75%表面消毒,把瓶用無菌袋或自封袋包裝,然后放置在適當(dāng)?shù)暮袃?nèi),盒周圍用棉花等做防震防壓處理。當(dāng)溫度低于10度是要加保溫措施,如暖寶寶等。
細(xì)胞培養(yǎng)條件備注完整,如培養(yǎng)基,培養(yǎng)溫度,F(xiàn)BS用量等。
備注:運(yùn)送時(shí)間原則在4天以內(nèi),如細(xì)胞生長(zhǎng)速度快,則加入的培養(yǎng)基血清可以減半,細(xì)胞密度在20%-30%。
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